基因表达转录水平调控转录激活讲义.pptVIP

基因表达转录水平调控-转录激活;在高等真核生物中，各种细胞的表型的差异很大程度上取决于那些有RNA聚合酶Ⅱ转录的可编码蛋白质的基因表达上的不同。原则上，这些基因的表达可以在任何一段上被调控。我们至少可以将它们分为5个调控位点，这一系列的过程如下所示： 基因结构的激活 转录起始 转录加工 向细胞转运 mRNA的翻译。;在真核生物中基因表达常在转录起始时受到调控。对于大多数基因来说这是主要调控点，它包挎启动子中染色质的结构改变，同时，基本转录复合体也结合到启动子上。组织特异性基因表达调控也是在转录过程中进行的，那么生物体通过什么样的调控方式进行呢？转录因子的参与或许可能很好的解释这些调控机制。;一、转录因子;效率而起作用，因此增加转录频率，是启动子充分起作用所必须的。 辅激活剂：与转录效率有关的另一组因子自身并不与DNA结合，而是通过连接激活剂和基本转录复合体。它们通过蛋白质-蛋白质相互作用起来反应。 其他：此外一些调节因子可使染色质结构改变。 ;激活剂结构：激活剂有着独立的DNA结合域和转录激活域。两者有着功能的独立性，DNA结合域负责结合DNA，并将转录激活域带到启动子的邻近区域；转录激活域则负责激活转录，转录激活域和基本转录复合体相互作用，这种作用与DNA结合域的取向和具体定位无关。;在研究蛋白质相互作用时候，可以利用激活剂的两个结构域独立性的特点进行研究。;二、结合域与DNA结合;在激活剂与DNA结合过程中，转录因子的应答元件可能位于启动子或者增强子中，而且，每个应答元件能被特异的激活剂所识别。 由单一因子调控多条基因的例子是热激反应，这种反应是很多原核与真核生物所共有的，它包括基因表达的多种调控：温度升高会关闭某些基因的转录，而开启热激基因的转录，从而导致mRNA翻译的 ;变化。 金属硫蛋白（MT）基因提供了单一基因受多种不同机制调控的例子。 ;金属硫蛋白保护细胞免受过多的金属损伤，它能与重金属结合，并将其排出体外。此基因仅表达基础水平，可被金属离子（如镉例子）或糖皮质激素（GR）诱导出很高的水平。;正如前面所说，激活剂具有DNA结合域和转录激活域，不同的转录因子其DNA结合域也是有所差别的，因此可以根据DNA结合域将激活剂进行分型。这些分型包括：锌指基序、类固醇受体、螺旋-转角-螺旋、螺旋-环-螺旋以及亮氨酸拉链结构。;1.锌指基序;锌指蛋白中，每一个锌指形成两个螺旋，N端形成β折叠，C端形成α-螺旋。在与DNA结合过程中，三个α-螺旋正好与DNA一个大沟结合，每一个α-螺旋中，都有两个特异性序列与DNA结合。;锌指存在于辅助RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ的转录因子中因此，当蛋白质含有多个锌指，至少我们可以将它作为转录因子去研究其作用。 当蛋白质仅含有单个锌指时，锌指可能参与RNA的结合而不与DNA结合，或它与任何核酸结合活性均无关。如原型锌指蛋白TFⅡA，它既结合5S rRNA基因又结合其产物5S rRNA。;2、类固醇受体;受体的N端显示了最低的保守性，他们包含转录激活的其他区域。C端结构域结合激素，它们在类固醇受体家族中有30%-57%的相关性，反应了各种激素的特异性。;类固醇受体的DNA结合域也是一类锌指，但是它只含有Cys而没有His残基。在与DNA结合过程中，它所发挥的功能仅仅是识别DNA序列以及提供DNA结合空间。;类固醇的应答元件是含有两个半位点的回文结构或者同向重复结构。 ;在转录激活过程中，类固醇受体通过与配体的结合而被激活，激活的类固醇受体的第一个锌指识别应答元件的半位点序列，而第二个锌指则负责二聚化，决定亚基之间的距离。最后各个亚基在第二锌指处形成二聚体，通过形成二聚体的方式而结合DNA。对DNA的结合调节也是通过不同亚基之间形成亲和力不同的二聚体进行调节。;3、同源域;同源域负责DNA的结合，在蛋白质之间交换同源域的实验表明，DNA识别特异性取决于同源盒。同源域的C端与原核生物阻抑物的螺旋-转角-螺旋结构有相关性。其结合DNA方式如右图。;另一组包含同源域的蛋白质是一系列Hox蛋白，它们以相当低的序列特异性结合DNA。Hox蛋白与DNA结合时是作为异源二聚体以其偶合体结合DNA . 同源域蛋白可以是转录激活剂或阻抑物，这些因子本质是依赖于其他结构域的，其本身仅负责结合DNA.;4、螺旋-环-螺旋;大多数HLH蛋白在HLH基序附近有一个强碱性的，对DNA结合非常重要的区域。一段由15个氨基酸组成的序列中约有6个保守残基，含有这类区域的蛋白质称为b HLH蛋白。 b HLH蛋白包括广谱表达的蛋白质和组织特异性的b HLH蛋白。;HLH蛋白在与DNA结合时候，是通过HLH蛋白质之间形成二聚体的方式结合DNA的。由bHLH蛋白组成的二聚体与DNA结合能力