浙科版高中生物选修三1.2《基因工程的原理和技术》.pptVIP

【互动探究】　(1)重组DNA分子导入受体细胞发生碱基互补配对吗？ (2)目的基因能直接进入受体细胞吗？ 【提示】　(1)不发生。 (2)目的基因由于具有大分子性，不能单独进入受体细胞，必须由载体携带进入。 专题1 基因工程 第二节 基因工程的原理和技术 基因工程的基本原理：让人们感兴趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。 基因工程的基本操作程序主要包括 五个基本步骤： 1）目的基因的获得 2）重组DNA分子的形成 3）将重组DNA分子导入受体细胞（宿主细胞） 4）筛选含有目的基因的受体细胞 5）目的基因的检测与表达 步骤一：获得目的基因 目的基因是人们所需要的基因：如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 1. 化学合成 已知其脱氧核苷酸序列 已知其转录生成的mRNA 的序列 已知其翻译产物（表达产物）的氨基酸序列 目的基因的获得方法 直接合成：若基因_____，核苷酸序列又 ______ ，则可用此法。 较小 已知 逆转录法： 目的基因的mRNA 单链DNA 双链DNA (即目的基因) 逆转录 合成 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 聚合酶链式反应（PCR技术） Kary B. Mullis PCR是由美国科学家穆利斯提出的一种体外简化条件下模拟DNA体内复制的DNA快速扩增的方法，此技术获得1993年诺贝尔化学奖。 利用PCR技术扩增 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ 、 ___________.前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板(已知基因的核苷酸序列) 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 必须对目的基因有一定的了解， 需要设计引物 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性25℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 2. 从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 受体细胞 (直接分离法) 从基因文库获得 例1 下列不属于获取目的基因的方法的是 (　　) A．利用DNA连接酶复制目的基因 B．化学方法合成目的基因 C．从基因文库中获取目的基因 D．利用PCR扩增目的基因 　__A__ (1)化学合成法。 (2)PCR技术。 【探规寻律】　DNA复制与PCR技术的比较 DNA复制 PCR技术 场所 细胞核内 生物体外 原理 碱基互补配对 碱基互补配对 酶 DNA聚合酶、解旋酶 热稳定DNA聚合酶(Taq酶) 条件 模板、ATP、引物链、常温 模板、ATP、引物链、温度变化(90 ℃～95 ℃→55 ℃～60 ℃→70 ℃～75 ℃) 原料 四种脱氧核苷酸 四种脱氧核苷酸 特点 形成的是整个DNA分子，一个细胞周期只复制一次 短时间内形成大量DNA片段(目的基因) 步骤二：形成重组DNA分子（基因表达载体） 操作： （1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出粘性末端。 （2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的粘性末端。 （3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成一个重组DNA分子（重组质粒） 基因工程中的DNA重组与减数分裂过程中的DNA重组完全相同。对吗？ 【提示】　不对。前者属于无性重组，并发生在不同种生物间，打破了物种间的界线，可以定向地改造生物的遗传特性，此操作均在细胞外进行。　 思考 例2 将目的基因