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——显微化学反应:主要用于药材的临时切片或粉末,主要进行: 细胞壁的鉴别:如木质化细胞壁、木栓化细胞壁等。 各类成分的鉴别:如糖类、蛋白质、生物碱等。 ——显微定位:就是用显微化学的方法确定药材中化学成分的存在部位(有效部位),以此鉴定药材的质量和品种。 基本要求:有效成分明确,选择有效成分具有的特殊反应。使之产生颜色或结晶,确定有效成分存在部位。 具体方法: 利用显微镜及显微测量的某些手段,对一定重量单味药材粉末中的某些显微特征数量进行分析,或测定粉末性中成药中某个组分百分含量的一种方法。 显微定量 本法亦适用于粉末中药混存物的含量测定。 显微定量分析主要用于解决采用理化方法难以控制中药质量的一些问题。 需定量的药材应呈细粉状态,被测目的物一般需具备2个条件: 一是应轮廓清晰、可以计数的颗粒。 二是应易于检识且遇常用的显微化学试剂和封藏剂不发生形态变化。 定重量、定面积法:该法是一种直接定量的方法。 比率计数定量法:“石松子法”。 3 显微特征的观察与描述 一般描述方法 粉末特征描述 细胞形状描述 组织排列描述 大小的描述 颜色的描述 数量的描述 先多数后少数 先特殊后一般 先感观后测试 4 电子显微镜鉴定技术 电子显微镜主要分为透射电镜和扫描电镜两大类。在中药鉴定工作中常使用扫描电子显微镜或分析电子显微镜。 理化鉴定法就是利用中药中存在某些化学成分的化学性质和物理性质,通过化学的、物理的或仪器分析的手段,鉴定其真伪、纯度、内在质量,以及有害物质的有无或含量多少。 四、理化鉴定法 1 理化鉴定的应用范围 2 理化鉴定的一般方法 就是根据中药具有的各种特殊成分的理化性质,进行的真伪鉴别。包括物理分析法、化学分析法和物理化学分析法。 就是根据中药含有的功效成分或主要成分,测定其相对的含量,本法主要用于中药的质量评价和纯度检查。 即使用仪器或其他方法测定某些中药如挥发油类、油脂类、树脂类、加工品类、提取物以及某些液体中药的物理常数,以鉴定其真伪和纯度的一种方法。 利用中药中所含的某些化学成分,在一定温度下能够升华的性质,获得升华物后,在显微镜下观察其升华物的形状、颜色或加某种化学试剂观察其化学反应作为鉴别的特征。 微量升华 物理常数的测定 利用生药含有蛋白质带电荷的成分,在同一电场作用下,由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同,而泳动方向和速度不同,在一定时间内,各成分的泳动率不同,结合谱带数和染色不同达到鉴定的目的。 利用某些化学试剂能与中药中的某种或某类化学成分产生特殊的气味、颜色、沉淀或结晶等反应,来作为鉴别真伪的手段。 电泳分析法 化学定性分析 生药的化学定量分析是通过对中药含有的某种有效成分、有效部位、杂质或有害物质的含量测定,来控制中药质量的一种方法。 生药化学定量分析通常包括重量分析法和容量分析法两大类。 化学定量分析 它是通过测定中药中被测物质在某些特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。 药品分析一般用200~400nm的紫外光区;400~850nm的可见光区;2.5~15μm(或按波数计为4000~667cm-1)的红外光区。 光谱鉴定法 紫外光谱法:利用中药所含组分的不饱和程度及含量差异,导致紫外光谱峰位和峰强的差别来鉴定。 可见分光光度法:利用中药溶液颜色对光的吸收度,以鉴定某种成分或组分含量的方法。 红外光谱法:通常测定中药粉末、提取物或化学单体的红外曲线反映中药所含各组分官能团的差异。 原子吸收光谱法:用于中药中无机元素和杂质检查。 荧光光谱法:利用生药中的某些成分在吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质,对生药及其所含成分进行鉴定的一种方法。 荧光定性分析:其方法主要有下列几种: 一是直接取生药的饮片、粉末或其浸出液,如秦皮。 二是本身无荧光的中药,经化学方法处理后。 三是利用荧光显微镜观察生药的粉末或切片。 荧光定量分析:利用被测物质的荧光强度和溶液浓度成正比的关系,对中药所含的成分进行含量测定。 色谱鉴定法 柱色谱法 纸色谱法 薄层色谱法 薄层扫描法 毛细管相鉴定法 气相色谱法 高效液相色谱法 质谱鉴定法 核磁共振光谱鉴定法 热分析法 色谱光谱联用分析法 X射线衍射法 聚类分析法 免疫鉴定法 细胞生物学鉴定法 生物效价测定法 纯指标测定法 DNA遗传标记鉴定法 mRNA差异显示鉴定法 五、生物鉴定法 利用生药或其所含的化合物对生物体的作用强度,以及用DNA特异性遗传标记特征和基因表达差异等来鉴别生药的品
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