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IF克隆技术介绍基因克隆背景简介TA克隆限制性酶切克隆平滑末端克隆缺点：连接效率低 耗时较长 需要特定限制性酶切位点 Clontech专利In-Fusion克隆产品In-Fusion? HD Cloning System任意载体任意基因片段这是一款让您随心所欲地实现基因定向克隆的产品！ In-Fusion?基因克隆特点 In-Fusion?克隆技术的原理1常见问答In-Fusion?系列产品介绍In-Fusion?优点及应用实例423 主要内容In-Fusion?克隆技术的原理1常见问答In-Fusion?系列产品介绍In-Fusion?优点及应用实例423 主要内容In-Fusion?基因克隆技术原理示意图In-Fusion专利酶50 ℃，15 min单管反应Clontech专利In-Fusion是一种快速、简单、高效的基因克隆技术！ In-Fusion?克隆技术的原理1In-Fusion?优点及应用实例常见问答In-Fusion?系列产品介绍423 主要内容In-Fusion?克隆技术的优点简便、快速、高效的克隆技术4321不附加任何多余序列可同时克隆两个或多个DNA片段 不受限制性内切酶酶切位点的限制 简便、快速、高效的克隆技术 快速！ 简便、快速、高效的克隆技术 高效！In-Fusion HD无论是克隆长基因片段还是克隆多个基因片段都能保持较高的克隆效率。 不附加任何多余序列克隆位点AC任意载体线性化载体不附加任何多余序列的重组载体B目的DNA片段In-Fusion连接反应15 min PCR扩增不需要的碱基序列无缝克隆：不附加任何多余序列与载体相同的15 个碱基 序列引物设计 不受限制性内切酶酶切位点的限制目的DNA片段选择插入位点表达载体引物设计纯化混合PCR扩增PCR扩增In-FusionIn-Fusion 重组载体In-Fusion克隆不受限制性内切酶酶切位点的限制: 在cDNA序列中插入内含子,荧光蛋白基因 在cDNA序列添加UTRs 转换纯化标签例如Myc 转换为His 缺失蛋白表达区域… 可同时克隆两个或多个DNA片段Step 1: 制备线性化载体Step 2: 目的DNA片段扩增片段2片段3片段1Step 3: 一次In-Fusion连接反应线性化载体重组载体 克服传统克隆技术的限制克服其它克隆技术的限制其它克隆技术的限制In-Fusion解决方案载体的限制 不同克隆试剂盒都需要与之匹配的载体必须使用提供的载体只要载体末端和插入片段末端具有15个同源碱基， In-Fusion就可以将任意PCR片段插入任意线性化载体中。必须进行限制性内切酶酶切和连接需要独一无二、兼容的酶切位点极少的合适酶切位点In-Fusion不受限制性酶切位点的限制，因此在目的片段及使用的载体中是否存在合适的酶切位点并不妨碍克隆。亚克隆繁琐多片段不能同时克隆In-Fusion能够在一次反应中同时克隆多个片段，无需进行亚克隆。对于大片段克隆效率较低对于插入片段有限制In-Fusion系统能够高效克隆0.05-15 kb DNA片段。非定向克隆需要筛选目的片段插入方向 正确的克隆In-Fusion是基因定向克隆技术，因此无需进行目的基因片段正确插入的克隆的筛选。会附加多余碱基序列In-Fusion是无缝克隆：不附加任何多余碱基序列。不适合中型和大规模克隆工程In-Fusion技术已经成功用于多项高通量克隆工程。 In-Fusion?克隆技术的应用多片段克隆构建载体模型插入突变位点高通量克隆 应用实例实例：多个DNA片段（1 kb, 2 kb, 3 kb)同时克隆【方法】使用TaKaRa高品质PCR酶分别扩增1 kb、2 kb、3 kb的目的DNA片段 和2.7 kb的载体，并将扩增产物混合，使用In-Fusion? HD试剂盒完成 克隆。利用高效率的感受态细胞StellarTM Competent Cells（产品编 号：636763）转化并进行蓝/白斑筛选。 引物设计及目的基因片段扩增引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列 载体线性化PCR扩增酶切处理 In-Fusion连接反应线性化载体目的基因片段Cloning Enhancer处理，37 ℃ 15 min， 80 ℃ 15 min In-Fusion专利酶反应液直接转化In-Fusion连接反应50 ℃ 15 min 【结果】 引物设计原则引物的5’末端必须包含与载体末端相同的15个碱基序列引物的3’末端必须包含与目的基因片段相互补的特异碱基序列 引物设计原则 引物设计网络工具/infusion/infusion在线支持工具 In-Fusion?克隆技术的原理1In-Fusion?系列产品介绍常见问答In-