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蛋白质总结专题知识宣教;蛋白质的结构与相关功能;;;蛋白质的性质和分离、纯化 ;5蛋白质的颜色反应;6、蛋白质相对分子质量的测定 ;根据分子大小不同的方法 透析和超过滤
利用溶解度差别的纯化方法(实践最常用的方法a盐析b有机溶剂分级分离)
根据电荷不同的纯化方法 (PAGE、醋酸纤维素薄膜电泳、离子交换层析)
利用选择性吸附的纯化方法
利用对配体的特异生物学亲和层析: 一步处理即 亲和力的纯化方法可分离所需蛋白质,纯度很高
;(一)蛋白质的含量测定
①凯氏定氮法
②双缩尿法
③ Folin-酚试剂法
④紫外吸收法
⑤考马斯亮蓝结合法 灵敏度高,重复好
⑥胶体金测定法 灵敏度最高
(二)蛋白质的纯度测定
电泳、沉降、HPLC和溶解度分析等。;蛋白质实验部分;氨基酸纸层析;相对迁移率 Rf = X/Y ;考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度;实验原理;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量;电泳过程中有3种物理效应:
样品的浓度效应;
对被分离分子的筛选效应;
电荷效应。
迁移率大小:
分子大小
分子形状
净电荷(荷质比);测定方法;谢谢
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