微生物与生化学研究所微生物学组专题讨论.pdf

微生物與生化學研究所微生物學組專題討論 題目 :Motile cilia of human airway epithelia are chemosensory 作者： Shah AS, Ben-Shahar Y, Moninger TO, Kline JN, Welsh MJ 文章來源：Science. 2009 Aug 28;325(5944):1131-4. 演講人：Hsiu-Ping, Lin 林修平 R97B47403 指導老師：Chii-Shen, Yang 楊啟伸 助理教授 演講日期：October 26, 2009 演講地點：The 6th classroom 摘要 纖毛是真核細胞中微小的突起狀胞器，依其功能分為初級纖毛和運動纖毛兩種 。 初級纖毛就如同細胞的天線一樣， 其上表現有多種的蛋白質受體 ，負責偵測外在 環境的刺激；而運動纖毛則產生運動的機械力 ，位於人體呼吸道上皮細胞的運動 纖毛可藉其擺動，避免吸入的有害物質進入肺部。本篇研究發現呼吸道的上皮細 胞可在其運動纖毛上表現數種偵測苦味的蛋白質受體，苦味的分子 刺激細胞的訊 息傳遞，增加胞內鈣離子的含量，並增加運動纖毛的擺動速率。作者推測 ，由於 這些運動纖毛除了本身的運動之外，亦可偵測外界有害分子並增加擺動的頻率， 顯示呼吸道上皮細胞對環境存在一「細胞自發性的防禦」現象，同時也證明了運 動纖毛像初級纖毛一樣能偵測到環境的刺激。 Keywords ：chemosensory 、chemotaxis 、cilia 、human 前言  本研究之重要性 呼吸道上皮細胞由於不斷接觸到人類呼吸所吸入的空氣，也因此環境中若有各 式各樣的汙染物，包括毒化物、懸浮微粒、病毒顆粒或細菌等，最先感受到的 就是這群上皮細胞 。而呼吸道本身會藉由分泌黏液，將這些有害物質給包裹起 來，經由纖毛的運動送出體外，這也是為什麼我們吸入髒空氣，會感受到呼吸 道不舒服而想要咳嗽的原因，然而 人類對於這些細胞是如何感受到有害物質， 並給予適當回應的相關機制卻仍不十分明瞭，本篇研究將有助於釐清此一問 題。 前人作過的研究 纖毛依其功能可分為初級纖毛和運動纖毛兩種[1,2,3] ，初級纖毛上有表現多種 受體，可偵測各種不同的刺激 [1] ，然而一個細胞通常只會有產生一個初級纖 毛，其結構為 9+0的纖毛軸絲；相反的，一個細胞可產生數十至上百個運動纖 毛，而運動纖毛的結構則為 9+2的纖毛軸絲 [1,2,3] 。初級纖毛和運動纖毛雖然 1 在功能上有所不同，但這兩種纖毛在結構上和其分子層次的細節上仍有其相似 之處[3] ，體染色體隱性遺傳疾病 Bardet-Biedl Syndrome會同時影響兩種纖毛 的正常功能，更顯示其在演化上的關連性 [4] 。 作者為何要作本研究 過去有研究發現，有些初級纖毛除了偵測外界環境外，還可旋轉的運動 [5] ， 但目前仍未發現運動纖毛可如同初級纖毛般，具有偵測外界環境的功能。此外， 作者認為，呼吸道上皮細胞對有害物質的偵測與防禦是維持人體健康一道不可 或缺的防線，而這些大量存在於細胞上的運動纖毛應該要具有偵測這些物質的 能力，如此一來方可解釋細胞對於環境刺激的高靈敏度。  本研究欲完成之項目 作者藉由前人所做的 DNA微陣列分析 [6] ，發現呼吸道上皮細胞會表現一些 T2R 系列的苦味分子受體蛋白，因此作者挑選了數個此類蛋白為標的，利用抗 體標定、免疫螢光染色及 共軛焦顯微鏡，取得二維空間的圖片，並組合成三維 空間立體影像，證實蛋白質在細胞中的表現分布位置 。此外，作者也將用一些 苦味分子去刺激這些細胞，並偵測其胞內鈣離子的濃度變化，以期得到訊息傳 遞的相關證據。 材料與方法 細胞株 細胞株來自捐獻者的氣管及支氣管上皮細胞，由University of Iowa In Vitro Models and Cell Culture Core提供。在抗體標定及免疫螢光呈色的實驗中，細 胞生長於膠原蛋白覆蓋的濾材上，處於一氣液交面的環境。這些上皮細胞經過 14 天的培養，分化成