厦门大学天然药物化学第二章糖和苷.ppt

二、单糖绝对构型确定 对映异构体的分离原则 衍生化，引入新的手性中心→非对映体 色谱柱具备手性 方法 GC HPLC 手性色谱法: 昂贵 旋光检测器：仪器昂贵 旋光比较法：样品用量大 1、GC 单糖+手性试剂→非对映体化→TMS化 方法 D，L-单糖与单一构型的手性试剂(L-)反应 1种单糖与2个手性试剂(D，L-)反应 2、HPLC 手性试剂： (S)-(-)-1-苯基乙基胺 样品用量少 灵敏度没有GC高 二、糖链结构的测定 (多糖) 纯度 MW 单糖的鉴定 单糖绝对构型的测定 单糖之间连接位置的决定 糖链连接顺序的决定 苷键构型、氧环的决定 1、纯度的测定 纯度 不同于小分子化合物 相似链长的平均分布 方法 超离心法 HPCE 凝胶色谱法, 柱h:d40 旋光测定法：不同浓度乙醇↓，比较 官能团摩尔比法、RI、HPLC法等 2、MW 传统方法 物理方法：沉降法、光散射法、粘度法、渗透压法、超滤过法、超离心法 凝胶柱色谱法 MS ESI-MS：单或多电荷质子 MALDI-TOF-MS MALDI (基质辅助激光解析电离)：激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程 多为单电荷质子! 3、单糖的组成 全水解 PC 显色确定：单糖的种类 TLCS：大致定量 GLC 多糖：MeOH解→TMS化 以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作标准 HPLC 5、单糖之间连接位置的决定 多糖：全甲基化→水解→GC定性和定量 水解 先用90%HCOOH水解，再用0.05M H2SO4或CF3COOH水解 MeOH解：有时会造成糖连接位点的甲基化，少用! 甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置 低聚糖 1H-NMR：全乙酰化→2D-NMR 13C-NMR测定：苷化位移 6、糖链连接顺序的决定 缓和水解法 将多糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序 13C-NMR：弛豫时间T1 外侧糖较大 同一个糖基本相同 质谱分析：FAB-MS 2D-NMR 重点回顾 糖的构型构象 反应 Molish 反应 样品 + 浓H2SO4 + α-萘酚 → 棕色环 酸水解反应 反应难易 苷原子的电子云密度↑ 质子化位阻↓ 环张力↑ (稳定性↓) 反应方式 酸水水解法 两相水解法 温和酸水解 盐酸甲醇水解 端基质子的J值与构型 J值确定糖端基的构型 2-H处于a键的糖 6~8 Hz: H1处于a键 2~4 Hz: H1处于e键 2-H处于e键的糖 !!! 鼠李糖优势构象：1C式 × 苷化位移 (glycosidation shift) 定义 糖苷化后 端基碳 多向低场移动 酯苷：稍向高场! 醇苷元 α-C：向低场移动 β-C：多向高场移动 酚、酯苷元 α-C：向高场移动 β-C：稍向低场移动 其余碳的影响不大 这种苷化前后的化学变化，称苷化位移 化学位移 端基质子：δ4.3~6.0 黄酮3-β-D-Glc: 5.3~6.0 黄酮其它位置的β-D-Glc: 4.8~5.2 醇苷：4.8 其它质子: δ3.2~4.2 甲基5C糖: δ~1.0 (-CH3) 邻偶 (vicinal coupling): Jvic, 3J 饱合型化合物 开链脂肪族化合物由于σ键自由旋转的平均化，使3J数值约为6~8Hz 3J与键长、取代基电负性、两面角等因素相关 两面角：3J = 4.2 - 0.5cosf + 4.5cos2f 邻位电负性↑， 3J ↓： 3J =7.9-n0.7Dx Dx: 取代基与H电负性的差值 端基质子的J值与构型 J值确定糖端基的构型 对于2-H处于a键的糖 6~8 Hz: H1处于a键 2~4 Hz: H1处于e键 2-H处于e键的糖：甘露糖、来苏糖、鼠李糖等 a-e, e-e两面角为60°或120° J值相近 (0~5 Hz ) 无法判断 !!! 鼠李糖优势构象：1C式 二、13C-NMR 化学位移 -CH3：~18 CH2OH：~62 CHOH：68~85 呋喃糖C3、C5：多80 端基C：95~105 100：多数的β-D、α-L苷 少数降为~98：酯苷、酚苷 (注意1H-NMR的数值)、叔醇苷 100：多数的α-D、β-L苷 *特殊：D-arabinose 1JC1-H1与苷键构型 吡喃糖 C1式 164 (160~165) Hz: β-D、α-L 165 (170~175) Hz: α-D、β-L 1C式：鼠李糖，相反! α-L： 160~170 Hz β-L： 150~160 Hz 呋喃糖：无法判断 苷化位移 (glycosidation shift) 定义 糖苷化后 端基碳 多向低场移动 酯苷