温敏突变株的分离生工班第一小组.pptVIP

温度敏感突变株的分离 定义 在诱变处理后的群体中能分离到这样一类突变株:它们在许可的温度下能正常生长，其表型和野生型没有区别，在非许可温度条件下不能生长或微弱生长，表型与野生型不同，这种条件致死突变株即温度敏感突变株 温敏突变株的特性 TS突变株主要由必需基因的突变导致某些基因产物（某种酶）的结构发生改变而引起的，即突变体的酶蛋白一级结构氨基酸序列发生了改变，而酶的活性中心并未发生改变。有时 非必需基因的突变也可产生温敏突变株。 温敏突变株的突变位置，就谷氨酸而言，据推测，发生在与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构基因上。这种基因突变，最常见的事错义突变，主要是结构上的碱基发生转换或颠换引起氨基酸序列的改变。其次，还有二次移码突变、结构基因末端缺失突变等。 温敏突变株的筛选方法 （1）温敏突变株的诱发 （2）富集 （3）分离筛选 （一）温敏突变株的诱发 根据试验目的选择出发菌株，用合格的诱发因子进行诱变处理。由于这种突变株主要由基因错义突变所致，所以使用诱变剂时，要选择易于引起碱基置换的亚硝基类、磺酸脂类化合物，或亚硝基、紫外线等诱变剂。诱变处理方法和剂量同常规育种基本相同。 （二）富集 TS突变株的出现频率极低，仅有0.1%左右。为了提高筛选概率，诱变后的菌悬液先要进行富集。富集方法有抗生素法、物理方法、H3-前体法等。 1.抗生素法 这是常用的方法，其原理与营养缺陷型抗生素