免疫检验第十二章免疫组化.pptVIP

（二）免疫胶体铁细胞化学染色法 胶体铁是一种阳离子胶体，将抗体分子标记上胶体铁，通过普鲁蓝反应呈色，胶体铁颗粒有一定大小，还具有一定电子密度，可用在电镜和光镜水平的抗原定位研究。 （三）酶免疫电镜技术 酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度，借助于电子显微镜观察，证明酶的存在，从而对抗原进行定位。 （一）荧光免疫组织化学技术的应用 自身抗体的检测 游离在外周血中的抗体 固定在组织中的抗体 HEP-2细胞抗着丝粒抗体的阳性显色 肾小球抗基底膜抗体的阳性显色 一、免疫组织化学技术的临床应用 (二）酶免疫组织化学技术的应用 提高病理诊断准确性（HE可观察到炎性细胞浸润，ED1（巨噬细胞标记物）染色可观察到巨噬细胞浸润） 对肿瘤细胞增生程度的评价 肿瘤转移分期判断 辅助诊断免疫性疾病和感染性疾病，观察免疫复合物沉积状况 1、间接法荧光抗体染色与直接法相比，优点为 ???? A、非特异性荧光染色 B、抗原定性检测??C、检测不同的抗原，只需制备一种荧光抗体??D、特异性更高??E、可用于抗原的定位检测2、PAP复合物中的酶是 ???? A、辣根过氧化物酶???? B、碱性磷酸酶???? C、葡萄糖氧化酶???? D、胶原酶???? E、胃蛋白酶 3、当前免疫电镜技术中应用最广的标记物是 ??? ? A、辣根过氧化物酶???? B、胶体金???? C、硝酸银???? D、放射性核素???? E、铁蛋白4、双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记A抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记B抗体，呈什么颜色 ???? A、黄绿色，橘红色???? B、橘红色，黄绿色???? C、红色，淡黄色???? D、淡黄色，红色???? E、蓝色，红色 荧光免疫组织化学技术的类型及其原理？ 酶免组织化学技术的类型及其原理？ 亲和组织化学技术的类型及其原理？ 抗原 底物 PAP法 桥抗体 PAP复合物 第一抗与第三抗的动物种属须相同 操作只需三步 PAP复合物稳定，酶不易洗脱，避免了酶桥法的弊端 大大减弱背景着色 ① 桥连抗体存在的非特异性抗体，因其与第1抗体并非同种属，不能与抗酶抗体结合 ② 抗酶抗体中存在的非抗酶抗体，虽可与组织成分结合，但此抗体不能与酶结合，不会有酶活性。 + + + 底物 二抗/Ab2 兔源一抗/Ab1 Ag 兔源PAP复合物 Ag Ag Ag Ag-Ab1-Ab2-PAP复合物 （三）双桥PAP法 基本原理:是在PAP法中通过两次连接桥抗体和PAP而建立起来的，通过双桥可结合更多的PAP复合物于抗原分子上。这种放大方式由于重复使用桥抗体，使桥抗与PAP复合物中的抗酶抗体未充分饱和的Fc段结合，或桥抗体与特异性一抗尚未饱和的Fc段结合。对抗原有明显放大作用，对于组织细胞微量抗原的检测更有实用价值。 抗原 底物 双桥PAP法 桥抗体 第一抗与第三抗的动物种属须相同 PAP复合物 四、酶免疫组化染色中的常用的酶及显色底物 常用种类: 辣根过氧化物酶/HRP底物显色（DAB)棕色或灰蓝色(AEC) 最常用 碱性磷酸酶/AP 底物显色玫瑰红色(α-萘酚磷酸盐与快红反应）或深蓝色 (α-萘酚磷酸盐与快蓝反应）;靛蓝四唑（紫蓝色） 最敏感 葡萄糖氧化酶/GO 底物为葡萄糖，配以NBT和PMS显色蓝色 敏感性较低，显色底物不易保存 β-半乳糖酶等 酶的选择: HRP染色结果比AP染色结果保存时间长 含有内源性HRP的组织切片:首选标记酶为AP AP和HRP结合可进行双重或3重免疫组化标记,对比清晰 采用荧光素标记已知抗体（或抗原）作为探针，检测标本中靶抗原（或抗体），在荧光显微镜下，分辨出抗原(或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算其含量。以达到对抗原(或抗体）物质定位、定性和定量测定的目的。 ★荧光免疫组织化学技术 一、组 织 的 处 理 标本的类型： 涂片和印片 组织切片 细胞培养标本 活细胞 标本的保存 ： 标本固定干燥后，最好立即检测 保持干燥、置4℃甚至-20℃ 以下保存 二、荧光免疫组化染色 直接法： 优点：操作简便、特异性高 缺点：敏感度偏低、抗体制备麻烦 间接法： 优点：较直接法灵敏，标记一种抗 体可以鉴定多种抗原 缺点：非特异荧光、操作时间较长 双标记荧光免疫染色法 用两种荧光素分别标记 不同抗体，对同一标本 中的相应两种抗原同时 检测 标记抗体A 抗原A 抗原B 标记抗体B 标本 载玻片 亲和组织化学（Affinity his