2013-生物样品分析方法的建立和确证8.pptxVIP

生物样品分析方法的建立和确证;简介 2.体内药物分析方法设计与建立 3.方法学确证;1.1 生物样品分析是药代研究的必备手段;1.2 方法学类型及特点： 体内药物分析方法大致可归为： 1. 色谱法：吸附、分配、分子筛、离子交换、亲和等， HPLC-UV，HPLC - MS ;1.2 方法学类型及特点： 2. 免疫分析法 ： ELISA ，enzyme-linked immunosorbentassay EIA，enzyme immunoassay RIA，radioimmunoassay ;1.2 方法学类型及特点 3. 同位素: 1H 14C 125I ; 体内药物分析方法特点 灵敏度高： 浓度低 受到给药剂量的限制 受到生物利用度的限制 专一性好： 生物内源性物质的干扰 体内新形成的代谢产物干扰 样品量少： 血液（血浆、血清、全血） 　　　　　 尿、胆汁、唾液、汗液、脑脊液 　　　　　 粪便、组织器官; 方法快捷： 不是专门的方法学研究， 利用方法较快的阐明药理学的问题。 可靠、重现性好： 药代实验的不可重复性。 药物类型多： 需要多种仪器、技术手段的配套;1. 2.1 光谱分析法 比色法 紫外分光光度法 荧光分光光度法; 1.2.3 毛细管电泳法 分离效率高; 专一性较高 毛细管区带电泳 　 胶束电动毛细管色谱 　 毛细管凝胶电泳 　 毛细管等电聚焦 　 毛细管等速电泳 　 毛细管电色谱法 ; 1.2.5 同位素法: 灵敏度高; 专一性差 放射强度表示标记药物量(eq.ng/ml) 同位素技术与其他分析法相结合以提高专一性;12;2. 体内药物分析方法设计与建立;;2.1.2 了解待测药物的特性, 调研文献 　　 药物的结构、理化性质 检测方法? 溶解度? 稳定性? …… 药物的药理和毒理作用机制 生物样品:动物属性? 组织器官? 　　 体内代谢情况 　　 药物的剂量 给药途径 干扰成分的多少 　 样品的预处理方法 ;2.1.3 仪器设备与实验室条件 文献资料的可参考性? 可重复性? 别人可做的事情是否适合我们? 实验室硬件建设是否与研究课题相互匹配? ;2.2 体内药物分析方法设计与建立的一般步骤;3生物样品分析方法的确证;3生物样品分析方法的确证;生物样品分析方法的全确证;CFDA;FDA;EMA;基本概念;基本概念;基本概念;基本概念;基本概念;(1) 特异性;30;31;32;33;34;(2) 标准曲线和定量范围;36;37;图1 典型标准曲线;(3)精密度和准确度;40;41;(4)定量下限;43;(5) 稳定性;45;46;47;48;49;50;(6)提取回收率;基质效应(matrix effect);基质效应和提取回收率;提取回收率;基质效应;稀释效应;57;携带效应（ Carryover Evaluation）;Carryover可允许接受的范围 “≤20% of LLOQ”;假定：在validation试验中，观察到1000ng/ml（线性范围的 最高浓度）样品引起 50% of Carryover (残留量)，;携带效应实验;未知样品再分析 Incurred Samples Reanalysis(ISR);Incurred Samples Reanalysis(ISR);部分确证;65;66;67;微生物学和免疫学分析;生物样品分析方法的应用;生物样品分析方法的应用;分析方法的应用;72;73;新版说明;REFERENCES /cder/guidance/index.htmGuidance for Industry, Bioanalytical Method Validation, FDA, 2001 《