石蜡切片的制作过程.pdf

石蜡切片的制作 目的要求：了解生物制片的基本原理和方法；了解石蜡切片制作的基本过程；学会制作石蜡 切片。 一、生物制片的基本原理 （一）生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法，其目的是提供在显微镜下以适度的样品， 有效地对其进行形态和功能观察研究。 （二）生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时，除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达 到观察目的外，其余大部分生物体，因为组织较厚，光线不易透过内部等关系而达不到观察 的要求，为了达到此目的，就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片，经过一系列处理， 使光线易于透过，即可进行观察。因此，根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。 这些方法，各有优缺点，应该适当的配合使用，才能获得比较理想的结果。 1．切片法 （1）切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具，将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片，而制成切片标 本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一 定的硬度，然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、 火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下： ⅰ．石蜡切片法 石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规 制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um 以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块， 较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太 长。 ⅱ．火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及 石蜡，不经高温，可避免组织收缩及变脆，适于精细材料（如脑）的切片，也引火棉胶有韧 性切片不知有折卷或破裂，适宜于大块组织及多空洞的组织（脑、眼球），硬度较高的组织 （骨、肌腱）。缺点：手续麻烦、费时间，切片不能切薄，起码在 10um 以上，不能作连续 切片，因此，在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ．冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂（如氯乙烷）在变成气体时吸收大量的热使组织 迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰 冻，冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便，组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片，因而 可节省很多时间，十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断，银材料不经溶媒处 理就可直接进行切片，材料不受试剂的激烈刺激及温度影响，所以组织没有显著的收缩，细 胞形态不致有大的改变，也引冰冻切片不需有机溶剂处理，所以能保存脂肪、类脂等成分， 所以冰冻切片法常用于组织化学，尤其是神经组织，临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织，经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均 适合冰冻切片，但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片，而用酒精、甘油保存 的材料必须充分水洗后才易于冰冻，否则不易切成完整的切片（银究竟、甘油都能妨碍冰冻）。 冰冻切片的缺点：不能作连续切片，组织块不能过大，过大不易结冰，冰冻切片易于破碎， 一般冰冻切片机不易薄切，其切片往往要比石蜡切片厚1～2 倍，染色也不记石蜡切片清晰， 观察要有一定经验。 ⅳ．炭蜡切片法 炭蜡切片法优点是操作时间比火棉胶和石蜡法都短，在急用场合2～3 小时即可制成切片标 本。组织经固定后不经酒精及二甲苯直接进入炭蜡，故组织收缩少，能和石蜡法一样薄切， 并可经行连续切片，染色效果也好，又因组织或器官不经有机溶剂处理，因而可作脂肪及类 脂的检查，可代替冰冻切片法制作脂类制片。 缺点：对大块及坚硬易碎的组织不适宜，切片时室温不可过高，因易软化，炭蜡吸水性强， 极易融化故包埋块应妥善保管。制成的连续切片也不如石蜡法的质量高。 （2 ）切片法制作的过程（以石蜡切片法为例） 采集标本―→动物―→麻醉或杀死―→割取所需组织―→固定―→冲洗―→脱水或保 存―→透明―→透蜡―→包埋―→修块―→切片―→贴片机展片―→烘干―→脱蜡―→染 色―→封片。 ２．非切片法 （1）非切片法的种类 非切片法就是生物体个体或组织不用经过切片机，把其制成标本的一种方法。这种方法的优 点是操作方法简便快捷，能够保持生物体或组织原有的状态，人为产物少，缺点是应用范围 有限。如压碎法中的标本又改变某些组织细胞结构的正常关系等缺点。 ⅰ．整体封片法 将