构建表达载体实验流程与其注意事项.pptVIP

* 酶的质量标准 酶活单位：酶量，时间 酶的浓度：10 units/uL; 20 uints/uL等 保存条件: -20～-30 ℃ 切割位点：有无其他活性 酶切体系: buffer及与其它酶双切的buffer等 所用底物： DNA量，切后再连接的程度 反应温度：一般为37℃,但许多酶对温度有特殊要求 甲 基 化： 星 活 性: 所加酶量过多 保护碱基: 怎样使用公司目录 不同酶的反应缓冲液及活性 双酶切 酶切后具有共同的粘性末端 * 核酸酶操作注意事项 通常，不同公司出产的内切酶，它的菌株来源、制备工艺、纯度及活力、酶切活性的优化等都可能存在不同，试剂公司会对自己的内切酶进行比较全面的分析。因此，说明书及目录中的技术资料是最具有针对性的资料。 注意事项： a. 内切酶如无特殊要求，应该保存在-20~-30度。 温度过低：酶会冻结，反复冻融，降低酶活 温度过高： b. 酶在使用时应置于冰盒中取酶。 不可用手捏管底部 移液器吸取时，酶管不可离开冰面。 c. 酶使用完后应尽快旋紧盖子。 d. 吸取酶时的tips，最好是长些。 * 内切酶buffer 盐离子 低--中--高 通用 promega A—B—C—D …… TaKaRa L—M—