14.蛋白质的提取和分离.pptxVIP

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DNA的粗提取与鉴定 ;目的要求;实验思路;实验原理;实验材料和用具;实验用具:铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(100ml,一个,50ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。 ;8、DNA的鉴定;二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计;(1)先将新鲜的鸡血离心,获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可;讨论:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质;讨论:方案二与方案三的原理有什么不同?;(四) DNA的析出与鉴定;2、 DNA的鉴定;小结;(一)案例一:以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取;2、实验原理;4、课前准备鸡血细胞液;②柠檬酸钠作用;答:因为DNA不溶于冷酒精,而其他物质可以溶解在酒精中,使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中;讨论:;答:整个实验共“两次蒸馏水,三次过滤,两次析出,六次搅拌”;过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为1-2层;③两次析出;(2)为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?;(二)案例二:以菜花为实验材料进行DNA的粗提取;研磨液的配制方法如下:将10.1 g Tris加入到50 mL蒸馏水中,使其溶解,然后,用2 moL/L的HCl溶液调节pH至8.0,再加入8.76 g NaCl 、37.2 g EDTA 、20 g SDS。待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1 000 mL;③过滤:在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1000 r/min的转速,离心2~5 min,取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液;观察你提取的DNA颜色,如果不是白色丝状物,说明DNA中的杂质较多;二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功,如果不呈现蓝色,可能所提取的DNA含量低,或是实验操作中出现错误,需要重新制备;本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质

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