Tricine小分子蛋白电泳流程.docxVIP

Tricine-SDS电泳流程 一、实验准备 1、试剂 尿素（Urea）、β-巯基乙醇（BME）、过硫酸铵（AP）、四甲基乙二胺（TEMED）、丙烯酰胺（Acr）、甲叉双丙烯酰胺（Bis）、三羟甲基氨基甘氨酸（Tricine）、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、十二烷基硫酸钠（SDS）。 2、溶液配制 （1）正极缓冲液（10×）：2M Tris，pH8.9； （2）负极缓冲液（10×）：1M Tris，1M Tricine，1% SDS； （3）凝胶缓冲液（3×）：3M Tris，0.3% SDS，pH8.45； （4）3C丙烯酰胺储存液：48% Acr，1.5% Bis； （5）5C丙烯酰胺储存液：47% Acr，2.5% Bis； （6）36.5% Urea； （7）10% AP； （8）TEMED； （9）75% C2H5OH； （10）H2O。 二、实验步骤 1、不同组成的丙烯酰胺溶液的配制 Tricine-SDS的凝胶由不同分子组成的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺混合液聚合而成。其中浓缩胶由3C丙烯酰胺储存液配成4%的丙烯酰胺溶液聚合而成，夹层胶由3C丙烯酰胺储存液配成10%的丙烯酰胺溶液聚合而成，致密胶由5C丙烯酰胺储存液或6C丙烯酰胺储存液配成16.5%的丙烯酰胺溶液（添加或不添加36.5%尿素）聚合而成。凝胶配方如下表所示（制备1块厚度为1mm的凝胶需要添加的各溶液的体积）。