第4节各类高效液相色谱法.pptVIP

第四节、各类高效液相色谱法 一、吸附色谱 二、化学键合相色谱法 化学键合相：采用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体表面上形成的固定相 键合固定相：不流失；化学性质稳定；热稳定性好；载样量大；适于梯度洗脱 键合相色谱法：正相～和反相～。 正相：固定相的极性大于流动相的极性---适用于分离极性与强极性化合物。 反相：固定相的极性小于流动相的极性，适用于分离非极性、极性或离子型化合物。 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 键合相色谱固定相 1）非极性键合相：C18 、 C8 、甲基、苯基（反相柱） 2）中等极性键合相：醚基（正相或反相柱） 3）极性键合相：氨基、氰基（正相柱） 分离原理 正相键合相色谱 固定相：极性键合相---极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN） 主要靠范德华作用力的定向作用力、诱导作用力及氢键作用力 流动相极性增大，洗脱能力增强，组分的K值减小 反相键合相色谱 固定相：极性较小的键合相，苯基、烷基等 流动相溶剂的极性大于固定相 分离机理：疏溶剂作用理论：组分分子中的非极性部分与极性溶剂产生疏溶剂斥力，与键合相的疏水基团产生疏水缔合作用，产生保留作用；另一方面，组分分子中有极性官能团时，极性部分受到极性溶剂的作用，产生解缔作用并减小其保留作用。 疏溶剂缔合作用示意图 决定组分保留值的因素（烷基键合固定相对组分分子的缔合作用和解缔作