分子生物学讲义-第四章.ppt

蛋白质合成和运转示意图 蛋白性质 运转机制 主要类型 分泌 蛋白质在结合核糖体上合成，并以翻译-运转同步机制运输 免疫球蛋白、卵蛋白、水解酶、激素等 细胞器发育 蛋白质在游离核糖体上合成，以翻译后运转机制运输 核、叶绿体、线粒体、乙醛酸循环体、过氧化物酶体等细胞器中的蛋白质 膜的形成 两种机制兼有 质膜、内质网、类囊体中的蛋白质 ??? 1、翻译-运转同步机制 ◇信号肽假说： 共翻译定位蛋白质定位信息存在于该蛋白质自身结构中（信号肽），并可通过与特殊受体相互作用，使蛋白质定位于靶位。绝大部分被运入内质网内腔蛋白质都带有一个信号肽。 信号肽 (signal peptide): 某种分泌蛋白质及细胞膜蛋白质等，以前体物质多肽的形式合成，其N末端含有作为通过膜时之信号的氨基酸序列，这种氨基酸序列称信号肽或信号序列（signal sequence）。由约15—25个氨基酸所组成。 ◇信号肽结构特点： （1）常位于蛋白质N末端，可切割； （2）长度：15 - 30个残基； （3）序列内有一个全部或大部分疏水组成的疏水核心； （4）靠近该序列 N 端常有1个或数个正电荷氨基酸； （5）其C-末端靠近切割处常带数个极性氨基酸，离切割点最近那个氨基酸常带很短侧链(Ala或Gly ) ? 信号肽能够形成包括两个α-螺旋的发夹结构。 ? 这一结构在信号识别颗粒(signal recognition particle ,简称SRP)的帮助下插入到粗面内质网的膜中。 ◇信号肽与蛋白质转运的关系 （1）完整信号肽是保证蛋白质转运的必要条件； （2）仅有信号肽不足以保证蛋白质转运发生，还要求运转蛋白质在信号序列以外的部分有相应的结构变化。 （3）信号序列切除并不是转运所必需； （4）并非所有运转蛋白质都有可降解的信号肽。(卵清蛋白) “信号肽”：能启动蛋白质运转的任何一段多肽！ signal recognition particle ( SRP) ? SRP是一个小的RNA-蛋白质复合体,由约300个核苷酸的7S RNA和6种紧密结合的蛋白质(分子量从9~72KDa)所组成。 ? 在翻译过程中它能够识别信号序列，指导核糖体到转运通道。 SRP可以分为两个结构域： （１）信号识别结构域:由7S RNA的大约第100至第25个核苷酸部分与19KDa、54KDa、68KDa和72KDa蛋白质所构成。 （２）延伸作用制动结构域: 7S RNA的其余部分(相当于Alu序列)与9KDa和14KDa蛋白质所构成,其功能是使肽链的延伸暂停。 新生蛋白质通过同步转运途径进入内质网内腔的主要过程 ★ 蛋白质翻译-运转同步途径的特点：（小结） □途径：核糖体 内质网 高尔基体 质膜 □特点： 1）核糖体合成的蛋白质的N端有一段额外的信号肽序列，在成熟的蛋白质中信号肽已被切除。 2）这类蛋白质的合成是按照边翻译边转运机制进行，即共翻译转运机制。 3）新生肽链进入ER腔内，就进行糖基化修饰或其他方式修饰；在高尔基体内还需要进一步修饰，以利于形成最佳的构象。 4）蛋白质折叠成特定有活性的构象。 5）转运到溶酶体或分泌小泡和质膜中去，或分泌到胞外。 2、前导肽的作用与性质 前导肽的不同区域可能在蛋白质跨膜运转过程中起不同的作用 （3）核定位蛋白的运转机制 释放因子(终止因子) I类释放因子： ? 识别终止密码子， ? 能催化新合成的多肽链从P位点的tRNA中水解释放出来； II类释放因子： ? 在多肽链释放后刺激I类释放因子从核糖体中解离出来。 细菌细胞: ? RF1 (I类) 能识别UAG和UAA， ? RF2 (I类)识别UGA和UAA。 一旦RF与终止密码相结合，它们就能诱导肽基转移酶把一个水分子而不是氨基酸加到延伸中的肽链上。 ? RF3 (II类)与核糖体的解体有关。 真核细胞： ? eRF1 (I类) 能识别三个终止密码子， ? eRF3 (II类) Overview of the events of translation (五)蛋白质前体的加工 1、N端fMet或Met的切除 2、二硫键的形成 3、特定氨基酸的修饰 4、切除新生肽链中非功能片段 新生的多肽链大多数没有功能，必须经过加工修饰才能转变为活性蛋白质。 新生蛋白质经蛋白酶切割后变成有功能的成熟蛋白质 左:新生蛋白质在去掉N端一部分残基后变成有功能的蛋白质 右:某些病毒或细菌可合成无活性的多聚蛋白质，经蛋白酶切割后成为有功能成熟蛋白。 1、N端fMet或Met的切除 无论原核生物还是真核生物，N端的甲硫氨酸往往在多肽链合成完毕前就被切除。 ◇ 细菌蛋白质N端甲酰基能被脱甲酰化酶水解。 ◇ 不管原核生物或真核生物，N