22基因工程的载体和工具酶.pptVIP

第二节 基因工程的载体和工具酶 基因工程的载体 一 基因工程的载体 载体的功能及特征 质粒（plasmid） 噬菌体DNA 1、载体的功能及特征 2、质粒 1、用含有EDTA的缓冲液悬浮菌体，加溶菌酶裂解细菌细胞壁； 2、加NaOH和SDS的混合溶液，去膜释放内含物； 3、加高浓度的醋酸钾溶液，沉淀染色体，去除染色体DNA及大部分蛋白质； 4、离心取上清液，用苯酚-氯仿萃取，去除痕量的蛋白质； 5、乙醇或异丙醇沉淀水相质粒DNA； 6、用无DNase的RNase去除残余的RNA（选择）。 2、噬菌体或病毒DNA l-DNA可在体外包装成噬菌体颗粒，能高效转染大肠杆菌 。 l-DNA载体的装载能力为25 kb，远远大于质粒的装载量 。 l-DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段，但不适合表达外源基因。 l-DNA重组分子需在体外人工包装成有感染力的噬菌体重组颗粒，方可高效导入受体细胞。 用于体外包装的蛋白质可直接从感染了l噬菌体的大肠杆菌中提取，现已商品化。 3、柯斯质粒 能像l-DNA那样进行体外包装，并高效转染受体细胞。 能像质粒那样在受体细胞中自主复制。 装载量大（45 kb）且克隆片段具有一定的大小范围。 不能体内包装，不裂解受体细胞。 二 基因工程的工具酶 限制性内切酶 DNA连接酶 其它酶类 T4噬菌体 电镜下的噬菌体 作业： 基因工程常用的载体有哪些？作为基因工程