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第二章 基因克隆工具酶 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 核酸酶 核酸修饰酶 一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease） 发现：1970年，Smith等人首先从流感嗜血杆菌d株中分离出HindII和HindIII 功能：识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链。 限制性核酸内切酶的发现与应用导致了体外重组DNA技术的发展，使人们有可能将很大的DNA分子定向性地切割成较小的DNA片段，然后运用各种技术手段对其进行分析，从而能对生物体的基因结构、组织表达及进化问题进行深入的研究 来源：主要是从原核生物中分离纯化得到。到目前为止，已经从近300种不同的微生物中分离出约500种限制性核酸内切酶 一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease） 生物学意义：限制性核酸内切酶，可以帮助细菌限制外来DNA的入侵 细菌中的防卫系统：限制与修饰现象 （1）细菌在其感受态的生理条件下，很容易吸收外源DNA进入体内。这种感受态可以是人为的，也可以是在自然条件下发生的。如果细菌不加限制地接受所有的外源DNA，细菌本身就会很快发生遗传变异甚至死亡。 （2）限制性核酸内切酶 （3）甲基化酶：对该特异位点的腺嘌呤A进行甲基化修饰，被修饰的DNA就不再被相应的限制酶切割了。 （4）细菌自身的DNA