实验八血型鉴定及交叉配血.ppt

实验八 血型鉴定及交叉配血实验 （一）ABO血型鉴定 1．实验原理 红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；ABO血型就是根据红细胞表面抗原来确定的，根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。 血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。 凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，进而引起红细胞破裂，产生溶血。 ABO血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血液分别与已知含A抗体和B抗体的标准血清混合，观察是否发生凝集现象，判断待测血液红细胞上有何种抗原，由此确定待测血液的血型。 ABO血型分类 ABO血型正反定型结果 （一）ABO血型鉴定 2．血型鉴定方法 标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。 分别吸取标准A血清和标准B血清各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。 采血针刺破左手无名指尖，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取血液，分别加入到玻片左、右两侧的血清内，并用牙签搅拌，使标准血清与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！） 手持玻片转动数次，转动时玻片应保持在一个水平面上，然后置室温下5min后观察结果。 肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。 进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。 取干净载玻片 滴加定型剂 消毒 取血 消毒 取血 消毒 观察 记录结果 实验步骤 ① ② 抗A 抗B ③用70－75％的酒精消毒取血部位 消毒取血部位 用针扎一下消毒部位，使血冒出，立即滴一滴血液在抗A或B上。 ④ 抗A 抗B 再用70－75％的酒精擦洗消毒刚用针扎的部位，然后再取一滴血液于抗B或A上。 抗A 抗B ⑤ 观察有无凝集，并按下表判定结果。 血型 抗A试剂 抗B试剂 A B O AB + - - + - + - + 呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示。 在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用“十”号表示。 主侧配血 用患者血清与供 者红细胞进行试验 次测配血 供血者血清与患 者红细胞进行试验 患者 献血者 主侧 次侧 （二）交叉配血试验 交叉配血的要求 主侧配血要求： 绝对不可以有凝集或溶血现象。 次测配血要求： 供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有溶血。 凝集 不凝集 交叉配血的目的 交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是为了防止输血后产生溶血性反应。 尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长的存活时间。 交叉配血试验方法 盐水介质配血 酶介质配血 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 抗球蛋白介质配血 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法 聚凝胺介质配血 凝胶方法配血 盐水介质配血方法 患者 献血者 主侧 次侧 离心 看结果 阳性 阴性 抗球蛋白配血方法 患者 献血者 主侧 次侧 37 ℃ ? 37℃ 水浴30分钟 三洗 抗球蛋白方法配血方法 加抗球蛋白 离心 看结果 阳性 阴性 酶介质配血方法 主次侧 均加酶 患者 献血者 主侧 次侧 酶介质配血方法 离心 看结果 阳性 阴性 37 ℃ ? 37℃ 水浴30分钟 二、Rh定型 1、使用盐水介质试剂 用LIM配制的红细胞悬液，可以代替 由生理盐水配制的红细胞悬液在盐水介质 试剂中进行Rh定型，两者定型方法和效果 均相同。 聚凝胺(Polybrene)配血方法 患者 献血者 主侧 次侧 ? 室温放置 1 分钟 主次侧均 加聚凝胺 聚凝胺(Polybrene)配血方法 离心 聚凝胺引起红细胞非特异性凝集 阳性 阴性 主次侧均 加重悬液 看结果