秘鲁鱿鱼肌肉中氧化三甲胺脱甲基酶的分离纯化及生化特性研究.pptVIP

* * 秘鲁鱿鱼肌肉中氧化三甲胺脱甲基酶的分离纯化及生化特性研究 李兆杰 付雪艳 薛长湖 中国海洋大学食品科学与工程学院 lizhaojie@ouc.edu.cn 2006/11/26 氧化三甲胺（TMAOase)是广泛存在于海洋水产品中的一种非蛋白氮成分，具有重要的生理功能。 调节渗透压 调节浮力。 稳定蛋白，防止尿素的变性作用。 保护蛋白，防止冷冻的变性作用。 保护蛋白，防止高压的变性作用。 调节蛋白中二硫键的形成。 罗非鱼中氧化三甲胺的合成机制 CBP，2002，131(B):371-386 lizardfish Red hake Walleye pollack Walleye pollack squid TMAO DMA + FA TMAOase 肌肉蛋白质的变性 这种现象的发生在鳕科类鱼中和鱿鱼类中可能会比较严重。 蛇鲻中，肾、脾，胆囊、肠、肝脏 Lwt, 1998, 31(5):449-453. 美洲大赤鱿（Docidicus gigas)的世界产量 茎柔鱼是柔鱼科中个体最大的种类，全长可达4米，体重可达50公斤以上，系浅海大洋性种。主要分布于东太平洋的秘鲁、哥斯达黎加海域及其外海，即北纬36度至南纬26度、西经125度以东的美洲西岸水域。 各产地鱿鱼丝的品质比较 41.55 5.28 烟熏味，味酸 日本，高桥 熏鱿鱼丝 21.5 5.64 无皮，酸甜适口 日本，白石海产 烤鱿鱼丝 23 5.48 带皮丝，味酸 日本，东京都 烤鱿鱼丝 21 6.09 带皮丝，味甜 日本，株式会社 烤鱿鱼丝 41 - 带皮，色红，无味 中国舟山 干鱿鱼鳍（北太） 33 5.90 无皮，色白，味甜 中国舟山 烤鱿鱼丝（北太） 25 5.90 无皮，色白，味甜 中国舟山 烤鱿鱼丝（秘鲁） 70 6.01 无皮，色微黄，味甜 中国青岛 烤鱿鱼丝（近海) 58 6.09 无皮，色白，味甜 中国青岛 烤鱿鱼丝（秘鲁） 甲醛含量（ppm） pH 描述 产地 品名 1.TMAOase 纯化 离心 秘鲁鱿鱼 粗酶 1M NaCl 匀浆 调节 pH 到 4.5 调节pH至中性 DE52 S-300 纯化酶 80 ℃加20min 实验方法 TMAOase Reaction mixture 10％TCA One unit (U) of TMAOase activity was expressed as 1 μmol DMA production per minute. 8000 rpm, 15 min 50℃, 1 h DMA determination 2. TMAOase assay centrifugation Fe2+ TMAO Cys Vc 3. Characterization of TMAOase Effect of pH on activity and stability Effect of temperature on activity and stability Effects of chemicals on the TMAOase activity Kinetic studies 鱿鱼中TMAOase 纯化倍数 16.0 839 159 135.7 2.3 S-300 50.2 276 52.6 426 8.1 DE52 64.2 35.7 6.78 545.1 80.4 Heated-treatment 80.6 12.6 2.39 684 286 Acid treatment 100 1 0.19 848.7 4510 Myofibillar fraction Yield (%) Purification fold Specific activity (U/mg) Protease activity (U) Protein (mg) Steps 实验结果与讨论 0 NaCl(M) 0.5 DE52 Fig. 1. Purification of the TMAOase from jumbo squid. Ion exchange chromatography on DE 52. 0.15-0.18M NaCl 116.0 35.0 14.4 18.4 45.0 25.0 17.5kDa 66.2 kDa S300 Gel filtration on Sephacryl S-300 and SDSof the purified TMAOase. S bovine serum albumin egg albumin phosphorylase b lysozyme 狭鳕肌肉组织中TMAOase的分子量 FISHERIES SCIENCE 2000