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生物化学实验预习题 生物与制药工程学院 生物化学课程组 编 实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 1、纸层析中何为固定相？何为流动相？滤纸起什么作用？ 2、点样的次数、点样的斑点大小与实验结果的关系如何？ 3、Rf值的含义、定义分别是什么？ 4、根据本实验原理试分析极性氨基酸与非极性氨基酸那一类移动的快一些？ 5、本实验是如何将未知氨基酸鉴定出来的？6、为什么要在垂直于滤纸的纹路划一条直线并点样？ 7、分析层析时将滤纸卷成纸筒时，滤纸的边缘能否接触？ 8、何种氨基酸与茚三酮的显色斑点为黄色？ 实验二 蛋白质的定量测定——双脲法测定蛋白质浓度 1、双脲法反应是否为蛋白质的专一反应？哪些物质会干扰测定？ 2、752型分光光度计如何使用？使用时应注意哪些问题？ 3、本方法是否适用于固体样品的测定？ 4、标准曲线可以用坐标纸绘制，也可以用统计学方法求出直线方程。现在人们通常用后一种方法，请思考如何求出直线方程？5、比色法测定物质含量的基本原理是什么？Lambert—Berer定律（吸收定律）是什么？ 实验三 影响酶活性的因素 1、人唾液中淀粉酶（属α淀粉酶）水解淀粉的变化过程是如何的/ 2、淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈什么颜色？ 3、反应过程中观察到淀粉水解物遇碘颜色的变化与淀粉酶的活性高低有何关系？ 4、影响酶活性的因素有哪些？ 5、0℃ 6、与班氏试剂反应产生沉淀的多少与淀粉酶活性的高低（反应快慢）的关系如何？ 实验四 维生素C的定量测定 1、此法能否测定出氧化型VC？能否测定出总VC的含量？ 2、滴定的速度为什么要控制？滴定的终点如何把握？ 3、组织捣碎机的使用方法及注意事项有哪些？ 4、微量滴定管的使用应注意哪些问题？ 5、为什么在抽滤（过滤）时弃去最初滤出的滤液？ 6、提取VC时为何用2％的草酸溶液提取？ 7、计算公式中的T值如何计算？ 8、VC标准溶液为何要装在棕色瓶中低温储藏？ 实验五 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 1、电泳的基本原理是什么？ 2、如何搭好电泳时的滤纸桥？ 3、为什么要识别薄膜的无光泽面和有光泽面？点样应在哪一面？电泳时点样面朝上还是朝下？点样端靠近正极还是负极？ 4、膜条点样后放置时间较长而变干，能否继续进行电泳？为什么？ 5、有人做电泳时发现电泳仪上有电压指示，但无电流通过。试分析出现这种情况的可能原因。 6、膜条透明时关键要注意哪几点？ 7、电极缓冲液可重复使用一定的次数，但能否无限制的重复使用？ 实验六 总氮量的测定――微量凯氏定氮法 1、样品为什么要进行消化？消化后蛋白质“氮”转变成了什么物质？消化过程应注意哪些问题？如何判断消化完全？如何做空白消化液？ 2、防止暴沸的方法是什么？为什么在蒸气发生器上加一安全管？ 3、如何判断整个蒸馏装置已经洗涤干净？ 4、加样后小漏斗中的水封的作用是什么？ 5、本实验过程中既要利用倒吸，又要防止倒吸。试分析何时需利用倒吸，何时又要防止倒吸？利用倒吸时该如何操作？ 6、为什么要进行样品蒸馏，又要进行空白蒸馏？ 7、你在实验中滴定时用的盐酸应该是经过准确标定的，如何进行标定？ 8、滴定时使用的微量滴定管应注意哪些问题？ 9、本实验过程如何做好用电安全及防止烫伤？ 10、本实验测定出的氮都是蛋白质中的氮吗？ 11、总氮量的计算公式，你是如何理解的（一定要理解！！）？如何由总氮量计算出蛋白质含量？ 实验七 核酸的制备及定量测定--动物肝脏DNA的提取 1、DNA在浓NaCl(1-2mol/L)和稀NaCl(0.14mol/L)溶液中的溶解度是怎样的？NaCl溶液中加入EDTA-Na有何作用？ 2、本实验中SDS有何作用？氯仿-异戊醇又有何用途？ 3、本实验需多次离心，多次离心的目的分别是什么？ 4、本实验提取的DNA是否为纯品？ 5、肝脏行鲜或肝脏在4℃ 6、为什么肝脏匀浆要充分（研磨要充分）？ 实验八 聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)（Ⅰ）凝胶制备 1、胶制备的原理是怎样？ 2、化学聚合和光聚合各有何特点？ 3、光聚合加入核黄素、TEMED各有何作用？ 4、氧的存在对凝胶聚合有和影响？如何除去溶解氧？ 5、凝胶浓度和交联度与孔径大小有何关系？柱状胶是指什么样的胶？ 6、凝胶制备时在制胶架凹槽中滴1—2滴蔗糖液的作用是什么？ 7、在称量Acr、Bis时应注意哪些问题？在制胶时应注意哪些问题？ 8、如何判断凝胶（浓缩胶、分离胶）聚合是否完成？ 9、T、C值的含义？如何根据T值计算出C值及Acr、Bis的用量？ 实验九 聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)分离血清蛋白质(核黄素-TEMED聚合系统)（Ⅱ）电泳分离 1、电泳的原理是什