08第八章基因重组与分子生物学技术.pptVIP

第五节 基因工程与医学的关系 一、疾病基因的发现与克隆二、生物制药三、基因诊断四、基因治疗五、遗传病的预防 载体DNA与目的基因的连接 （二）人工接尾法 即同聚物加尾连接法。当载体和目的基因无法采用同一种限制酶进行切断，无法得到相同得黏性末端时，可采用此方法。 此法首先使用单链核酸酶将粘性末端切平，再在末端核苷酸转移酶的催化下，将脱氧核糖核苷酸添加于载体或目的基因的3‘-端，如载体上添加一段polyG，则可在目的基因上添加一段polyC，故二者即可通过碱基互补进行黏合，再由DNA连接酶连接。 （三）人工接头法 将人工连接器（即一段含有多种限制酶切点的DNA片段）连接到载体和目的基因上，即有可能使用同一种限制酶对载体和目的基因进行切断，得到可以互补的黏性末端。 四、重组DNA的转化和扩增（转） 重组DNA需导入宿主细胞才能进行增殖或表达。重组质粒可通过转化（transformation）方式导入宿主细胞，即将大肠杆菌用CaCl2处理，增加细菌细胞壁的通透性，再与重组质粒DNA短暂温育，质粒DNA即可导入宿主细胞。 如果是用λ噬菌体作为载体的重组体，则需要用外壳蛋白进行包装，使之成为具有感染能力的噬菌体，再通过转染(transfection)方式将重组噬菌体DNA导入大肠杆菌等宿主细胞。 重组DNA导入宿主细胞后，即可在适当的培养条件下进行培养以扩增宿主细胞。对