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目的基因的分离 生物与食品工程学院 目的基因的分离 酶切 核糖体 PCR 差异显示 筛选目的基因 直接通过限制性内切核酸酶进行切割 适用于质粒，或病毒 等较小的DNA 分离核糖体上的 mRNA 已知基因编码的蛋白质 抗体 筛选目的基因 聚合酶链式反应简称 PCR（Polymerase Chain Reaction） PCR技术是在模板DNA、引物（人工合成）、Mg2+和4种脱氧核糖核苷酸（dNTP）存在的条件下，利用DNA聚合酶（Taq酶）催化作用，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸的循环过程，体外大量扩增特异DNA片段。 利用PCR扩增目的基因 需要知道目的序列的全序列或其两侧序列（引物）。 常规的PCR技术合成的DNA片段长度有限，一般在1Kb以内。 差别显示技术 1. 扩增两个系统的全 mRNA 特异性弱引物 2. 电泳比较差别 传统的减法杂交技术 原理：尽量除去两种样品中共同的序列，从而使目的基因序列得到有效富集。 操作步骤： mRNA mRNA cDNA 剩余的单链 cDNA即为目的基因 杂交 DNA插入诱变法分离目的基因 原理 ：当一段特定的DNA序列插入到植物基因的内部或其临近位置时，一般会诱导该基因发生突变。 步骤 ： 1. 插入已知 DNA 2. 通过插入的已知 DNA 筛选突变基因片段 3. 依据突变基因从野生植株中筛选目的基因