3流式细胞凋亡分析.ppt

流式细胞分析细胞凋亡 细胞对染料吸收能力的检测 赫斯特类染料（特别是HO33342)检测细胞凋亡的原理与上述染料不同。HO33342是双苯并咪唑家族成员之一，能特异与DNA螺旋中富含A-T重复序列结合。HO33342用氪激光激发紫外线荧光，激发光波长为352nm，发射光波长为400-500nm，产生蓝色荧光。 流式细胞分析细胞凋亡 细胞对染料吸收能力的检测 HO33342能被活细胞摄取，而其从细胞内排出是一个耗能的主动过程，依赖细胞膜上的P-糖蛋白泵。活细胞染色时，应考虑是否存在细胞抗药性问题，如有耐药性，则染色效果不佳。HO33342进入凋亡细胞比正常细胞多，将其与PI结合对凋亡细胞进行双染，可将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区分开来。 流式细胞分析细胞凋亡 细胞对染料吸收能力的检测 在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现为：正常细胞低蓝光/低红光，凋亡细胞为高蓝光/低红光，坏死细胞为低蓝光/高红光。 流式细胞分析细胞凋亡 caspase的流式细胞仪检测 caspase家族在细胞凋亡过程中起着重要作用，通过caspase对大分子结构的瀑布级联水解反应，导致凋亡发生。其中caspase-3是最重要的指示蛋白酶，活化的caspase-3可以蛋白水解切割和激活其他的caspase、相关胞质的靶位点（CK18）等。Caspase-3切割细胞因子，尤其是