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专题30 基因工程;考点 基因工程
考点清单;3.基因工程的工具
(1)限制性核酸内切酶
a.来源:主要是从② 微生物????(如细菌)中分离纯化出来的。
b.功能:识别并切开每条链中特定位点上的两个脱氧核苷酸之间的③????
磷酸二酯键????。
c.特点:具有专一性,表现在以下两个方面:
识别DNA分子中④ 某种特定的核苷酸序列????;使每一条链中特定位点的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
d.作用结果:产生⑤ 粘性末端????或平末端。
(2)DNA连接酶
功能:将末端碱基互补的2个DNA片段连接起来。;(3)载体
a.最常用的载体——质粒
实质:能够⑥ 自主复制????的双链环状DNA分子,是一种特殊的遗传物质,在细菌中以独立于拟核之外的方式存在。
b.其他载体:噬菌体、植物病毒和动物病毒等。
二、基因工程的基本操作步骤
1.获得目的基因
(1)目的基因:人们所需要的基因。如:人的胰岛素基因、植物的抗病基因等。
(2)获取方法;2.形成重组DNA分子
一般用⑨ 相同的????限制性核酸内切酶分别切割含有目的基因的供体DNA分子和载体(如质粒),使其产生相同的粘性末端(或平末端),然后用DNA连接酶将两者连接在一起,形成重组DNA分子。
3.将重组DNA分子导入受体细胞
常用的受体细胞:大肠杆菌、枯草杆菌、⑩ 酵母菌????和动植物细胞等。
4.筛选含有目的基因的受体细胞
(1)筛选原因:并不是所有的细胞都接纳了重组DNA分子。
(2)筛选方法举例:质粒上有抗生素如四环素的抗性基因,所以含有这种重组质粒的受体细胞就能够在有四环素的培养基上生长,而没有接纳重组质粒的细胞在这种培养基上不能生长,这样就能筛选出含有重组DNA分子的受体细胞。;5.目的基因的表达
目的基因在? 宿主细胞????中表达,产生人们需要的功能物质。
三、基因工程与遗传育种
1.转基因植物
培育优点?
2.转基因动物
(1)含义:转入了? 外源基因????的动物。
(2)培育优点:省时、省力。;名称;2.基因治疗指的是向目标细胞中引入? 正常功能????的基因,以?
纠正或补偿????基因的缺陷,达到治疗的目的。
五、基因工程与生态环境保护
1.利用转基因植物生产聚羟基烷酯,用于合成可降解的新型塑料。
2.改造分解石油的细菌,提高其分解石油的能力。
3.利用转基因微生物吸收环境中的重金属、降解有毒化合物和处理工业废水。;重难突破
一、基因工程的三大操作工具
1.限制性核酸内切酶
(1)限制性核酸内切酶(限制酶)的作用
限制酶切割时断开的是DNA分子中的磷酸二酯键(即相邻脱氧核苷酸间的键),而不是两条链之间的氢键。如图:
?;(2)限制性核酸内切酶具有专一性,表现在两个方面:
①识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列。
②切割特定序列中的特定位点。如图:;2.DNA连接酶
(1)DNA连接酶的作用
两个来源不同的DNA用相同的限制性核酸内切酶切割,形成相同的粘性末端(或平末端)。DNA连接酶能催化磷酸与脱氧核糖之间化学键的形成,将两个DNA末端的缝隙“缝合”起来。如图:
?;(2)几种易混淆酶的比较;3.载体的种类及作用
(1)载体应具备的特征
①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。
②有1个或多个限制性核酸内切酶切点,以便与外源基因连接。
③具有某些标记基因,以便进行筛选。
(2)载体的种类
①细菌质粒,最常用大肠杆菌质粒。
②噬菌体和某些动植物病毒。
一般来说天然的载体往往不能满足人们的所有要求,因此人们根据不同目的和需求,对某些天然的载体进行人工改建。;(3)作用
一是用它作为运载工具,将目的基因送到宿主细胞中去;二是利用它在
宿主细胞内对目的基因进行大量复制。
二、基因工程基本操作
1.基因工程基本操作“五步曲”
(1)获得目的基因
①序列未知:建立一个包括目的基因在内的基因文库,再从基因文库中获取。
②序列已知:化学方法(如逆转录法)合成或者用PCR扩增目的基因。
③PCR技术与DNA复制的比较;
;(2)形成重组DNA分子
?
①一般采用同种限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因,以获得相同的粘性末端(或平末端),以利于形成重组DNA分子,但有时用不同的限制性核酸内切酶处理也可以获得相同的粘性末端(或平末端)。;②目的基因的插入可能会破坏转基因生物原有基因的结构,影响转基因
生物的正常生长,甚至致死。
③限制性核酸内切酶只识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,对RNA不起作用。
④用DNA连接酶连接时,可形成3种不同的连接物:目的基因—载体连接物、载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物,导入受体细胞后,可利用抗性基因的差异进行筛选。;生物种类;(4)筛选含有目的基因的受体细胞
①原理:质粒上有抗生素抗性
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