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免疫组化技巧 1、做前防护：二甲苯有毒易挥发，二甲苯可以诱导白血病。必须在通风厨中脱蜡和透明。 2、脱蜡前将石蜡切片放入60度烘箱中烘烤2个小时，有助于脱蜡，并可以防脱片。 3、提高温度有助于二甲苯脱蜡，冬天时，可将二甲苯先放入37°孵箱中保温，再进行脱蜡， 提高脱蜡效果。 4、脱蜡过程，最后一步二甲苯应尽量保持新鲜二甲苯，同时将上次的二甲苯依次往前一个 二甲苯中更换，因为最前的二甲苯是石蜡残留最多，越往后的二甲苯中石蜡越少。 5、水化过程，最后的一个乙醇也应该勤换，同理，最后一个乙醇中的二甲苯最少。 6、消除内源性过氧化物酶建议用3%H2O2 （甲醇90ml+H2O2 10ml）（PS：H2O2原浓度 是30%的，变成3%应10倍稀释）, 甲醇具有固定作用，有助于保护组织。 7、抗原修复，0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），建议使用高压锅来抗原修复，高压锅温 度较为稳定，微波炉抗原修复火候控制不稳定，导致修复液经常沸腾时易引起脱片。 8、封闭前，建议使用免疫组化笔将组织部分画圈，防止抗体流出片子。很好用的，不过500 个大洋哦。 9、DAB显色程度把握，在目的组织处，显现出黄色或者棕色颗粒状时，而组织边缘尚还未 显色时，终止显色。简而言之，在边缘效应出现前，而目的蛋白显色出来时终止最佳