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第二章 核酸的化学 1.1 核酸的种类、分布和化学组成 1.2 核酸的分子结构 1.3 核酸的理化性质及其应用 1.1 核酸的种类、分布和化学组成 1.1.1 核酸的生物学功能 1.1.2 核酸的种类、分布 1.1.3 核酸的化学组成 二、分布 真核细胞 原核细胞 DNA 核染色体上 拟核染色体上 线粒体、叶绿体 质粒 RNA 细胞质 细胞质 细胞核 三、功能 DNA:遗传物质,是遗传信息的贮存和携带者。 RNA:1.转录DNA的遗传信息,并指导蛋白质的合成; 2.作为遗传物质(RNA病毒); 3.催化功能(核酶) 1.2 核酸的分子结构 一、 一级结构 二、 二级结构 三、 三级结构 四、 DNA和基因组 一、一级结构 脱氧核苷酸的排列顺序。 即:前一个核苷酸的3’-OH中的H与后一个核苷酸的5’-磷酸基团的-OH脱水形成。 阅读5’——3’ 1.双螺旋结构模型的主要依据 A: X射线衍射数据 (1)两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕形成右手双螺旋。反向平行是指一条链是5’-3’端,则另一条链必为3’-5’端。 (2)磷酸与核糖彼此通过3’,5’-磷酸二酯键相连接位于双螺旋外侧,形成DNA分子的骨架。碱基位于内侧。碱基平面与螺旋轴基本垂直,糖环平面与螺旋轴基本平行。 (3)双螺旋的直径为2nm,沿中心轴每旋转一周有10个碱基对(bp),螺距为3.4nm。两个相邻的碱基对之间相距的高度,即碱基堆积距离为0.34nm,两个脱氧核苷酸之间的夹角为36°。 (4)双螺旋结构上有二条螺形凹沟,较深的沟称大沟,较浅的称小沟。大沟的宽度为1.2nm,深度为0.85nm。小沟的宽度为0.6nm,深度为0.75nm。 3.DNA双螺旋的构象类型 DNA双螺旋结构:A、B、C、D、Z型 超螺旋结构 四、DNA和基因组 基因:DNA分子中最小的功能单位。 基因组:某生物所含的全部基因。 一、概述 二、tRNA的结构 三、rRNA 的结构 四、mRNA的结构 五、其它RNA RNA一级结构指核苷酸排列顺序。 二、tRNA的结构 核糖体——蛋白质合成场所 蛋白质(40%)+rRNA(60%) 原核:70S=30S+50S 真核:80S=40S+60S 18SrRNA(40S)、5SrRNA、 5.8SrRNA、28SrRNA(60S): 四、mRNA的结构 密码子:mRNA中的3个相邻核苷酸序列,是蛋白质合成中某一特定氨基酸的编码单位。 作为蛋白质合成的模板。 五、其它RNA hnRNA:核内不均一RNA,mRNA的初始转录物。 SnRNA:核内小RNA。 asRNA:反义RNA。 一、物理性质 二、核酸的变性 三、核酸的复性 四、分子杂交 五、核酸的序列测定 一、物理性质 性状: 溶解性: 粘性:DNARNA 两性解离: 光学性质:260nm 热变性: Tm:紫外吸收值增量达到最大增量一半时的温度称为DNA的熔解温度或解链温度。 大小与G+C含量成正比。 变性核酸的互补链在适当条件下重 新缔合成双螺旋的过程称为复性。 退火:热变性的核酸复性时需缓慢 冷却,这一过程称为退火。 四、分子杂交 退火条件下,不同来源的DNA互补区形成双链,或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 二、核酸的变性 双螺旋区氢键断裂,空间结构破坏,形 成单链无规线团状态的过程。 方法:加热,过量酸,碱,变性试剂等 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 变性后理化性质变化: 最显著: OD260增高 粘度下降 浮力密度上升 生物学功能部分或全部丧失 增色效应:DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 Tm 减色效应:DNA复性时,其溶液OD260降低。 三、核酸的复性 B:碱基成对的依据(chargaff定则) (1)同一生物的不同组织的DNA碱基组成相同;不同生物来源的DNA碱基组成不同,表现在(A+T)/(G+C)比值的不同。 (2)双链DNA,[A]=[T],[G]=[C],[A+G]=[C]+[T]。 C:电位滴定行为: 2.双螺旋结构模型的要点 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3.4nm 小沟 大沟 2nm (5)两条脱氧核苷酸链依靠碱基互补原则进行配对。彼此碱基之间靠A=T配对形成两个氢键、G=C配对形成三个氢键稳定结构。 氢键、碱基堆积力、离子键——作用力 B-DNA: Watson, Crick双螺旋。钠盐纤维,92%相对湿度 A-DNA:75% Z-DNA:左手双螺旋。 C-DN
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