小麦基因组DNA的提取.doc

小麦基因组DNA的提取 1 “S” Buffer提取法 采用Sharp等（1989）提出并经Devos等（1992）改进的酚-氯仿提取法。步骤如下： （1）取2ml离心管编号后放到离心管架上，每个离心管中放一颗直径约5mm的不锈钢珠，每个小麦样品取约50mg叶片剪成小段后放入相应的离心管中并盖上盖。 （2）将放有离心管的离心管架放入液氮中速冻，没有什么响声后取出，用专用的两个盖子夹好后，放在Mixer Mill MM 300上粉碎。设定参数（30hz,15s）进行第一次粉碎。第一次粉碎后取出整个样品在液氮中再一次速冻，转换内外侧进行第二次粉碎以确保叶片粉碎完全，第二次粉碎后将离心管架再放回液氮中，以避免造成DNA降解。也可用研钵加液氮研磨叶片。 （3）从液氮中取出离心管，迅速加入“S”缓冲液750μl，充分混匀后于65℃水浴中保温1-2h，水浴过程中温和混匀数次； （4）取出离心管，加入800μl酚—氯仿，颠倒混匀15min后离心，4000rpm，20mins。 （5）上清液移入另一离心管中，加入等体积的氯仿，颠倒混匀15min后离心，4000rpm，20mins（此步可省）。 （6）将上清液移入另一离心管中，加入0.6倍体积预冷的异丙醇，轻轻混匀, 静置一段时间（最好于-20℃冻一下），用枪头挑出DNA(或者离心10000rpm，10mins沉淀DNA)，70%乙醇浸洗两遍，