第七章 微生物遗传和变异1.ppt

大肠杆菌的4种接合型菌株 接合中断法 性导：F′菌株带有宿主基因信息，当与F-菌株结合时，可转导宿主部分遗传基因，并且可以质粒的形式表达。 原核微生物体内的质粒除了F质粒，还有R质粒、Col质粒、降解性质粒等。 降解性质粒：携带有降解某些复杂有机物的酶的基因，含有这类质粒的细菌，特别是假单胞菌，能降解复杂的有机物，尤其是一些有毒的化合物，如芳香族化合物、农药、樟脑、辛烷等，该类质粒一般按其降解的底物来命名，如樟脑质粒（CAM）、辛烷质粒（OCT）等。 质粒具有如下特点：可以自发或用人工诱变的方法去除；能自我复制，稳定的遗传；没有质粒的细菌不能自发的产生质粒，但可以通过转化、转导或接合作用的转移获得质粒；质粒可以携带供体细胞的DNA转移。 质粒的功能：质粒控制细菌的某一遗传性状；可以作为基因转移的载体。 质粒的这些特征可以用来培育优良菌种，构建一些多功能的有机物降解高效菌种。 质粒育种：将两种多种微生物通过细胞接合或细胞融合技术，使供体菌的质粒转移到受体菌体内，使受体菌保留自身的功能质粒，同时获得供体菌的功能质粒，从而获得了具有几种功能质粒的新品种。 举例： 尼龙寡聚物在化工厂污水中难以被一般微生物降解，已发现黄杆菌属、棒状杆菌属、和产碱杆菌属具有分解尼龙寡聚物的质粒，但它们不易在污水中繁殖，而污水中普遍存在的大肠杆菌又无分解尼龙寡聚物的质粒。冈田等人成功地把分解尼龙寡聚物的质粒pOAD基因移植到大肠杆菌内，使后者获得了该基因的遗传性状。 四、原生质体融合CAI 原生质体融合：通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，从而获得兼有双亲性状的稳定重组子的过程。 操作示意图 主要操作步骤： 1、选择两株有特殊价值和选择遗传标记的细胞置于高渗溶液中，加入脱壁酶（细菌、放线菌用溶菌酶，真菌用蜗牛消化酶）去壁。 2、所得原生质体加PEG（聚乙二醇）或借助电场的作用促融，然后在高渗溶液中稀释。 3、将稀释液涂在能促使细胞壁再生和进行细胞分裂的基本培养基上，待菌落生成。 4、将生长菌落的平板影印接种于各种选择培养基平板上，检出融合子，测定其生物学性状。 第四节 基因工程在环境保护中的应用 一、基因工程的基本过程 基因工程：是利用DNA重组技术，在体外通过人工剪切和拼接等方法，对生物的基因进行改造或重新组合，然后导入受体细胞内，使重组的基因在受体细胞中扩增和表达，从而产生出人类所需要的基因产物。 基因工程的基本操作： 1、目的基因的分离 主要方法： 从供体中提取 通过逆转录酶由mRNA合成cDNA 化学合成 2、选择优良载体载体条件：（1）可自我复制（2）能在受体细胞内大量增殖（3）只有一个限制性内切核酸酶切口（4）有选择性标记（5）具有安全性 常用的载体：质粒、噬菌体以及动植物病毒  3、目的基因与载体的体外重组 同一种限制性内切酶只在同样的碱基处切离，因此供体和载体的DNA片段会有互补的粘性末端，混合时很容易形成双链。 限制性内切酶：指能识别双链DNA分子的特定序列，并在其识别位点 或其附近切割DNA的一类内切酶。 4、将目的基因导入受体细胞 通过质粒转化法、噬菌体或病毒感染法可将重组的DNA分子导入受体细胞。 5、对目的基因的筛选和检测 6、目的基因在受体细胞中的表达 二、基因工程在环境污染生物处理中的应用 实例： 1、 A．Khan等从P.putda OV83分离出3-苯儿茶酚双加氧酶基因，将它与pCP13质粒连接后转入大肠杆菌中表达。 2、除草剂2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）是致癌物质，美国科学家已将降解2，4-D的基因片段组建到载体质粒上，转移到快速生长的受体菌内构建成高效降解2，4-D除草剂的工程菌。 3、我国科研人员将假单胞菌细胞内的抗镉基因转移到大肠杆菌HB101中，使得大肠杆菌HB101能在100mg/L的含镉液体中生长。 第五节 菌种的退化、复壮与保藏 一、菌种的衰退与复壮 衰退：指由于基因的自发突变而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 防止衰退的方法 1、减少传代 2、创造优良的培养条件 3、尽量采用单细胞或孢子传代 4、采用良好的保藏法 复壮：通过纯种分离，生产性状的测定，将已衰退的菌种中少数正常菌株筛选出来，以达到恢复其固有性状的措施。 1、纯种分离法 2、通过宿主体复壮 3、淘汰衰退个体 二、菌种的保藏 菌种是重要的生物资源。菌种保藏机构的任务是在广泛收集