第一章第一节-核酸提取-20170316.pptVIP

三、DNA提取原则 保证DNA结构的完整性（100-200kb） 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染 四、DNA浓度与纯度的测定 紫外光谱分析 EB荧光分析 （一）紫外光谱分析 1 定量分析： DNA(或RNA)分子在260nm处有特异的紫外吸收峰且吸收强度与系统中DNA或RNA的浓度成正比。（蛋白质：280，盐和小分子230）。光透过溶液后，紫外光被吸收，会造成光密度的差异，用OD（ optical?density ）来表示。 1OD=50ug/ml双链DNA 紫外分光光度计 比色皿 紫外光谱分析 2 纯度分析 DNA纯品的OD260/OD280为1.8 若比值高，含有RNA 若比值低，含有蛋白质 紫外光谱分析的特点 特点：准确，简便。 仪器：紫外分光光度计 操作要点 稀释 空白对照与样品测定 浓度测定 （二）EB荧光分析 1 定量分析： EB（溴化乙锭），是一种荧光染料，能插入DNA或RNA的碱基对平面之间而结合。结合后，能在紫外光的激发下产生桔黄色荧光。结合于DNA分子之上的EB的量与DNA分子长度和数量成正比，因此荧光强度可以表示DNA量的多少。 EB荧光分析的特点 优点：简单，经济，若结合凝胶电泳还同时分析出DNA的纯度。 缺点：准确性较低；不安全。 操作要点 稀释 带有EB的凝胶制作 样品与DNAmarker对照的点样 紫外灯下观察 RAPD——随机扩增多态性DNA AFLP——扩增片段长度多态性 SSCP ——单链构象多态性 cDNA AFLP——cDNA扩增片段长度多态性 TRAP—— 靶位区域扩增多态性 SCAR —— 序列特征化扩增区域 SRAP —— 相关序列扩增多态性 卫星DNA——Satellite DNA 小卫星DNA —— Minisatellite DNA SSR——简单重复序列（微卫星） * * 发育过程的精美图片；DNA到蛋白质的过程图；遗传研究的问题：由群体到分子遗传的过程 * 飞机航行的安全 * 举几个实例 * * TE是有Tris和EDTA配置而成的，主要用于溶解DNA，能稳定储存DNA。 * 浓度的重要性 * 紫外光波长:400nm 以下,可见光波长:400-760nm,红外光:大于 760nm 波长越短,频率越高、能量越大的波穿透达到的范围越大;波长越长,频率越低、能量越小的波穿透达到的范围越小。? * 5、分子遗传标记检测技术 RFLP——限制性片段长度多态性 第一代分子标记技术 （以southern杂交为基础） 第二代分子标记技术 （以PCR杂交为基础） 基于PCR： RAPD标记、ISSR标记、SSR标记、STS标记等 基于PCR与限制性酶切技术结合 AFLP标记、CAPS标记等 第三代分子标记技术 （以SNP为基础） SNP标记 5、分子遗传标记 缩写 英文名称 中文名称 1) RFLP Restriction fragment length polymorphism 限制性片段长度多态性 2) RAPD Random amplified polymorphic DNA 随机扩增多态性DNA 3) AFLP Amplified fragment length polymorphism 扩增片段长度多态 4) SSR Simple sequence repeat 简单序列重复 5) SNP Simple nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性 SSR： Simple sequence Repeats 短串联重复序列（STR/SSR） 微卫星是指以少数几个核苷酸（1-6个）为单位多次串联重复的DNA序列。 微卫星由核心序列和两侧的保守侧翼序列构成。 保守的侧翼序列使微卫星特异地定位于染色体某一区域，核心序列重复数的差异则形成微卫星的高度多态性。 SSR 分析 VNTR 可变串联重复序列（variable number random repeated sequence,VNTR),也称小卫星。 在酶切片段里边核心序列重复次数不同导致酶切片段长度的差异 又称为DNA指纹 与 RFLP 分析方法类似，利用探针杂交检测 区别在于酶切位点不在可变重复区，而在侧翼区 SNP:single nucleotide polymorphism 单核苷酸多态性 指染色体上的某个位点存在单个碱基的变化，包括单碱基的转换、颠换、插入及缺失等 原理： 与RFLP及S