分子生物技术在水产动物病害防治研究中的应用及其展望精.docVIP

分子生物技术在水产动物病害防治研究中的应用及其展望(精) PAGE PAGE 1 ———————————————————————————————— 作者： ———————————————————————————————— 日期： 第25卷第2期水产科学 Vol.25No.2分子生物技术在水产动 物病害防治研究中的应用及其展望 刘晓慧,周遵春,赫崇波,邓　欢,侯　林 2 2 2 (1.辽宁师范大学生命科学学院,辽宁　大连　116029;2.辽宁省海洋水产科学研究院,辽宁省 应用海洋生物技术开放实验室,辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室,辽宁　大连　116023) 关键词:分子生物技术;水产动物病害;防治;展望中图分类号:Q75 文献标识码:C ()205 　　随着我国水产养殖业不断发展,,养殖环境恶化、种质退化。因此加强对病害防治技术的研究,已成为我国当前发展水产养殖业的关键。近年来,我国开展了海水重要养殖生物病害发生和抗病力的基础系列研究,针对目前最突出的病害发生和抗病力问题,应用分子生物学技术从病原、生物种质和环境三方面入手,开展了多项研究和综合分析,并取得了一定的进展。分子生物学技术已经成为研究水产动物病害的一个重要手段,对于我国水产养殖业高效和可持续发展也有着十分重要的影响。 1　应用于水产动物病害防治研究的分子生物技术 1.1　DNA分子标记技术 分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,直接揭示来自DNA的变异。分子标记的发展对动物遗传学产生了革命性的影响,利用分子标记可以快速直接的观察和探究到整个基因组的基因变异。如今,其已被广泛应用到基因定位与克隆、作物遗传育种、物种鉴定及疾病诊断等领域中。目前应用于水产研究的分子标记有同工酶、线粒体DNA、RFLP、RAPD、AFLP、微卫星、SNP和 [1] EST标记8种。这里主要介绍应用于水产病害的3种标记:RFLP标记、AFLP标记以及微卫星标记。1.1.1　RFLP标记 RFLP(restricfragmentlengthpolymorphism)即限制性片段长度多态性,限制性酶可识别DNA上较短的序列,在识别位点上切开DNA,单个核苷酸的变化即可导致限制性酶切位点的缺失和增加,总DNA酶切后产生限制性酶切多态性。然后可与DNA探针或其它技术相结合对病原菌进行检测和鉴定。 Nicholson等(1996)在对水产上引起多种鱼病的双RNA病毒进行基因组差异分析时,应用RFLP技术,对编码VP2蛋白的一段cDNA进行酶切、分析,为不同地区水产双RNA [2] 病毒的分类提供依据。Marina等(2004)为了增加对不同地区鲑鱼致病菌Lactococcusgarvieae菌间的遗传关系的认识,利用RFLP结合血清学数据,研究了采自不同地区的病原菌间的遗传相似性,结果显示各发病地点的病菌均为纯 3]此外,RFLP技术也已被应用于检测一些鱼类致病菌在环境中的分布情况,以及其在不同时期的存活情况[4]。1.1.2　AFLP标记 AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymorphism)———扩增片段长度多态性技术,是建立在RFLP基础上的选择性PCR,可产生丰富而稳定的遗传标记,被认为是一种理想有效的分子标记技术,现已广泛的应用于遗传连锁图谱,遗传多样性分析和基因定位等研究中。 Nakamvra等(2001)利用AFLP标记技术和分群分析法结合构建了虹鳟白化病个体的遗传图谱,发现其中有4个标记与白化病基因位点相关并紧密连锁。这将有助于克隆虹鳟显性白化病基因,为从分子水平诊断、防治虹鳟白化病提 [5] 供一条有效的途径。Lund等(2002)对引起多种鱼疖病或溃疡病的气单胞菌属进行了遗传多样性分析,结果表明从大比目鱼、大菱鲆和鲑鱼中所分离到的该菌的遗传多样性要高于狼鱼和鳕鱼[6]。Thomas等(2004)应用AFLP技术对抗鲑鱼贫血症的个体和染病死亡个体进行了基因型分析,得到了340个AFLP标记,并与TDT方法结合来检测其QTL(QuantitativeTraitLoci)[7]。Arias等(2004)为了了解鱼类致病菌共质菌属柱形菌的种内差异,应用AFLP结合16S rDNA的RFLP分析,对采自不同地区的30条养殖鱼类体内分离到的F1柱形菌进行了研究,为研究该菌引起的鱼类流行病提供了资料[8]。1.1.3　微卫星DNA标记 微卫星标记是共显性的分子标记,能够揭示等位位点的遗传差异,具有RAPD等标记所无法比拟的稳定性,可以方便的用于辅助育种、覆盖目标