实验四、原生质体的分离效率、体积和表面积测定.pptVIP

实验四、 原生质体的分离效率、体积和表面积的测定 1、掌握原生质的分离和提纯技术； 2、原生质体积和表面积的测定； 3、分离效率的测定（目视法和荧光双醋酸酯法） 实验原理 原生质体的研究是近年来在生物学中比较活跃的领域之一。 原生质体（Protoplast）一词的使用始自Hanstein(1880), 是指： “用质壁分离能够和细胞壁分开的那部分物质组成了一个原生质体” 或“除去了全部细胞壁的细胞”， “一个为质膜所包围的裸露细胞”。 原生质体的分离和提纯是植物生理学、细胞生物学中的一项基本技术。 利用制备的原生质体可进行离体培养、全能性表达、细胞壁再生、质膜特性，以及各种细胞操作（如原生体融合）、遗传操作（如外源基因的导入）等，广泛应用于抗性生理、病性生理和细胞融合等领域。 早期分离制备原生质体采用机械法。其缺点是： （1）手续繁多，得率少； （2）材料局限于具有较大液泡的细胞或长形细胞的组织，如叶片、球茎的鳞片，果实表皮等。 直到1960年，Cocking 试用酶解法制备番茄原生质体首次获得成功。 其原理是细胞壁的组成物质主要有纤维素、半纤维素和果胶等，利用纤维素酶和果胶酶等在一定的条件下可将细胞壁的组成物质分解掉，使得原生质体游离出来。 图1、利用酶解法获得的蚕豆叶片细胞原生质体 实验材料 未经抗寒锻炼的小麦幼苗 抗寒锻炼的小麦幼苗。