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动力学测定方法的简介 江西医学检验1997年15卷第2期 动力学测定方法的简介 江西省临床检验中心李胜远严冰邮编330006 自从多通道分析仪,离心式分析仪问世 来,临床化学测定方法取得了飞速发展,临床 化学测定的自动化已日益普及.购置自动化 分析仪,运用动力学方法检测将得到广搓应 用_J’.本文着重介绍动力学测定法的基本 知识,以期对新开展工作者有所帮助. 1.化学反应过程和测定方法——动力学 法和终点法l的区别. 在临床化学测 定中,一般通过一次 以上的化学反应来 获得某种物质浓度. 绝大多数化学反应 又都具有一个动态 的反应过程(见附 图).此图是反映产 物量(或吸光度)与 反应时问的关系曲 一 r\,/一 + 蜒曩期牲性期非蝇性期t 化学反应的过程 线.虚线a反映二个不同时间:虚线a左侧, 随反应时问延长,反应产物量不断增加,此称 为反应动态期,虚线a右侧,随时间延长反应 产量无明显变化,反应已趋于平衡,称为反应 平衡期.任何化学反应都经历动态期朝着平 衡的方向发展,但反应速度各不相同.若在反 应中加入催化剂或加温来加快反应速度可缩 短反应达到平衡所需的时间,但都不会改变化 学反应的方向直至达到平衡.如果某反应产 物豹测定是在反应的动态期,称这类方法为动 态法(或动力学方法);如果是在反应达到平衡 期再进行测定的动态期,称这类方法为动态法 (或动力学方法);如果是在反应达到平衡期再 进行测定则称为平衡法(或终点法). 二种测定方法的根本区别在于终点法常 是用反应平衡后测定的吸光度(A)表示待测 物浓度,而动态法是利用动态期测定单位时间 内吸光度的变化(△A),即反应速度(或速 率),来表示待测物质浓度或酶活力.因此在 动态法中为了监测△A,就必须严格控制反 ? 23 应时间和反应温度,这在一般比色计或分光光 度计中很难达到.只有自动或半自动分析仪 才能采用动力学法测定.动力学法不仅大大 提高了检测准确性和测试速度,而且过去一些 不能开展的项目现在也能开展了.因此动态 法具有更明显的优越性.它代表了现代临床化 学检测的先进水平?. 2.动力学化学分析法【3.t】 2.1动态期时间与吸光度(产物浓度)曲 线. 2.11延缓期:在许多化学反应包括酶促 反应,在动态期开始时,并不是立即吸光度的 变化就与反应时问成线性关系.一般需要15 — 30秒或更长时间,才能达到监铡反应速度 的线性期.这一段时问在动力学法中称为延 缓期(图中虚线b左侧).不同测定项目有不 同的延缓期,在设计动力学方法的监测时间应 避开延缓期. 21.2线性期:延缓期后,吸光度的变化 与反应时间进入成比例的线性关系,这一时期 在动力学方法中称为线性期(图中b,c二虚线 之间).对待测物液度和酶活力的监测应在线 性期时间内进行. 2.13非线性期:线性期结速到平衡期开 始的一段时问称为非线性期(图中c,a二线之 间)在这段时间内,反应速度逐斯减慢,曲线 逐渐平坦,此时反应速度常常不能准确反应待 测物的含量或酶活力. 22延迟时间和测量时间 动力学方法测定中,开始反应到开始监测 的一段时间为延迟时间延迟时问内反应不 成线性,不能进行监’劂.不同项目,可有不同 的延迟时间.延迟时间在于:平衡反应体系温 度;排除干扰物的影响;消除比色池的气泡等 等.所以在动力学法中,避开延缓期,并正靖 地设置延迟时间和测量时间,才能得出正璃的 检测结果[2.4J. 23非线性 24 在速率法的测量时间内,分折仪要对反应 液进行多次监测.但在实际测定中,由于种种 原因可能致使单位时间内监测到的吸光度变 化(△A/rain)不尽相同,此即非线性.所以在 试验中反复出现非线性,应考虑试剂变质,延 迟时间设置不适当,样品酶活力是否过高,这 些均可造成非线性. 24动力学法分类?. 24.1一点法:在动态反应中,在预先规 定的时间,测定一点吸光度值.其中又分为终 止反应法和不终止反应法.使用动力学一点 法应注意延缓期必须小到略而不计,结果才可 靠,一点法只测某一特定时间的吸光度值,它 无法反映整个反应的实际过程,亦无法校正反 应的非线性或由延缓期引入的误差.使用一 点法只是酶促反应被终止了,而不是反应已经 达到平衡. 2.4.2二点法:在线性反应期中测定二点 吸光度值,根据二点间吸光度的差值来计算被 浸『物质的含量,二点间隔时间以秒计算.只有 自动或半自动生化分析仪才能准确控制吸光 度的变化.二点法可以避开延缓期和由干扰 物质的付反应所引起的非线性.但又同一点 法无法了解反应的实际过程. 2.4.3多点法:这是利用自动或半自动生 化分析仪,在一个化学反应的动态线性期,进 行多点连继监测的一种方法,多用于酶活性测 定.不同仪器对.删试的数据采用不同的处理 方法,常用detaA法(AA法),回归