实验三骨膜移植专题课件.ppt

* 【实验目的】 1.了解组织工程骨膜体内植入的方法及意义。 2.熟悉动物手术操作的基本技能。 * 【实验原理】 1.骨膜作用 除关节面的部分以外，新鲜骨的表面都附有骨膜。骨膜由纤维结缔组织构成，骨膜内含有丰富的血管和神经，对骨有营养作用，对骨的生长和再生有重要作用。骨膜可分为内外两层，外层致密，由许多胶原纤维束传入骨质，使之固定于骨面。内层疏松有成骨细胞和破骨细胞，分别具有产生新骨质和破毁骨质的功能。 * 骨膜的活性： 幼年期活动非常活跃，直接参与骨的生成； 成年时转为静止状态，但是，骨一旦发生损伤，如骨折，骨膜又重新恢复功能，参与骨折端的修复愈合。如骨膜损伤大，骨折愈合困难。 骨膜损伤的移植修复： ①自体骨膜移植：缺点—取材困难，造成新损伤。 ②脱细胞的细胞外基质：小肠粘膜下层，羊膜等。 小肠粘膜下层（扫描电镜照片） 小肠粘膜下层（SIS）简介： SIS由猪小肠经脱细胞处理制备而成。正常猪小肠壁由四层构成：粘膜层、粘膜下层、肌层和浆膜层。 SIS为白色半透明的薄膜状物质，本质是不含细胞的细胞外基质，其干重的40%由胶原蛋白组成，此外还包括氨基葡聚糖和糖蛋白等。 SIS各种基质成分之间的相互关系密切，共同维持组织的精细结构和微环境，不仅起支架作用，而且具有特殊的生理功能。胶原蛋白在体内以胶原纤维的形式存在，其纤维状结构对于组织培养细胞的粘附、生长和增值极为有利。 * 【实验要求】 1. 组织工程骨膜体内植入技术为例，了解动物手术操作的基本技能及组织工程产品的体内植入过程。 2. 初步掌握组织工程产品体内植入的技术方法。 【材料及试剂】 1.实验动物：Wistar大鼠 2.实验器材：已制备好的组织工程骨膜（小肠粘膜下层）、镊子、剪刀、止血钳、持针器，缝合针、缝合线，无菌棉球、废品缸 3.实验药品：生理盐水、10%水合氯醛、碘伏消毒棉球等。 * 【实验步骤】 1.取重约150g的Wistar大鼠，腹腔注射10%水合氯醛麻醉(3ml/kg)。待大鼠麻醉以后，将其腹卧位固定在动物实验台上行手术操作。 2.将组织工程骨膜从灭菌袋中取出，放入无菌生理盐水中浸泡待用。 * 3.暴露大鼠左侧下肢，用剃毛剪刀剪除腿部的毛，用碘伏或酒精进行充分消毒处理。 4.用剪刀沿纵轴方向将下肢的皮肤剪开3㎝并游离，应用止血钳依次钝性分离筋膜及肌肉等，直至暴露股骨干（长度1.5㎝）；其间止血钳止血、脱脂棉吸取渗血，保持清晰术野。 * 6.制备骨膜缺损模型：用纱布保护周围组织，应用手术刀片刮除股骨干表面的骨膜（约2mm2）。 7.从无菌生理盐水中将组织工程骨膜取出，剪取大于骨膜缺损面积5倍的骨膜，将SIS膜包绕骨膜缺损部位，用缝合线扎住SIS膜两端。（实际应用中最好用可吸收缝合线，不用拆线） * 8.组织工程骨膜植入以后，用碘酒消毒，将钝性分离的筋膜及肌肉等恢复正常解剖位置后行皮肤间断缝合，对和皮肤切口，碘酒消毒。 9.待大鼠复苏后，装笼饲养。术后连续3d青霉素肌注10000u。 * 【注意事项】 1.组织工程骨膜植入动物体内过程的无菌操作 2.固定动物后，剪毛时需注意以下几点： ⑴把剪刀贴紧皮肤剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮肤； ⑵依次剪毛，不要乱剪； ⑶剪下的毛集中放在一个盛有清水的玻璃平皿内，勿遗留在手术野和操作台周围，以保证手术野的清洁。 * 3.基本手术操作（具体内容参考动物手术学） 手术的基本操作，包括组织分离、止血、打结和缝合。 ⑴组织分离 组织分离包括使用刀、剪作锐性切开及使用手术刀柄、止血钳或手指等作钝性分离。 ⑵止血 手术过程中，组织的切开、切除等均造成不同程度的出血。及时止血，可防止严重的失血，同时保证术野清晰，利于切口的愈合。 ⑶缝合与打结 缝合的目的主要在于封闭切口，利于组织愈合。打结是止血和缝合的需要。 1）缝合 缝合方法主要包括：结节缝合（单纯间断缝合）、螺旋缝合（单纯连续缝合）和荷包缝合三种 2）打结 结的种类主要包括：方结（平结）、外科结和三叠结几种。 * 缝合方法 打结方法 * 【结果】 组织工程骨膜大鼠体内成功植入，大鼠苏醒，正常饮食。 【结论】 组织工程骨膜体内植入以后，可进行跟踪观察该移植物的体内植入情况，进行相关指标检测，从而评估组织工程骨膜的优缺点。 * 【思考题】 1.简述组织工程骨膜的植入过程。 2.组织工程产品体内植入的意义。 3.组织工程产品体内植入以后可进行哪些指标的检测