rubp羧化酶活性测定方法.docVIP

RuBP羧化酶是一种双功能酶，即可催化RuBP的羧化反应，又可催化加氧反应，故齐全名为RuBP羧化酶/加氧酶（RuBP carboxylase/oxygenase,简称Rubisco）。Rubisco 普遍存在于自养生物中，在C3植物中含量较为丰富，占叶可溶性蛋白质的50%以上，是自然界最丰富的一种蛋白质。在叶绿素间质中浓度可达300mg/ml。同时，Rubisco 也是高等植物中有机氮的重要贮藏形式。通过本实验进一步掌握光合作用中的关键酶Rubisco的性质，用分光光度 法测定Rubisco的羧化活性。 【实验原理】 Rubisco催化RuBP与一份子CO2结合，产生两分子PGA，PGA在3-磷酸甘油酸激酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下，产生3-磷酸甘油醛，并使还原型辅酶I（NADH）氧化，反应如下： RuBP+CO2+H2O----2PGA 3-PGA+ATP------1,3-二磷酸甘油酸+ADP 1,3-二磷酸甘酸+NADP+H+ -------3-磷酸甘油醛+NAD+ 通过上述偶联反应，可讲3-PGA的变化转变为NADP的变化来测定，因此可用紫外分光光度计在340nm处测定NADP的减少量来计算酶活力。 【实验材料】 植物叶片 【仪器设备及用品】 紫外分光光度计，冷冻离心机，匀浆器或研钵，移液管等 【试剂药品】 1.RuBPCase提取介质：40mmol/L(PH7.6)