RT-qPCR(实时荧光定量PCR).pptVIP

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2019-10-15 发布于湖北
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RT-qPCR(实时荧光定量PCR).ppt

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实时荧光定量PCR技术RealTime QuantitativePCR;Logo;Logo;非特异性荧光标记： 1、SYBR Green 结合于双链DNA小沟之间，只有和双链DNA结合后才发荧光。（在变性过程中无荧光，在复性及延伸过程中发出荧光）;;Logo;Logo;Logo;Logo;Logo;RT-qPCR 原理----融解曲线;RT-qPCR 步骤----SYBR Green法;反应体系的建立及优化: SYBR Green 使用浓度:太高抑制Taq酶活性，太低，荧光信号太弱，不易检测 Primer：引物的特异性高，否则扩增有杂带，定量不准 MgCl2（多聚酶的激活剂）浓度:可以降低到1.5mM,以减少非特异性产物反应Buffer体系的??化反应温度和时间参数:由酶和引物决定其他与常规PCR相同;;Thank you