王筱绘2,白露2,段昌柱1),2).PDFVIP

ISSN 1007 -7626 中国生物化学与分子生物学报 http :/ / cjbmb ． bjmu ． edu ． cn 20 12 年2 月 CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 28 (2 ):147 ～ 15 1 NIRF 泛素化p53 的作用过程中NIRF 与p53 结合域的测定 2 ) 2 ) 1)，2 )* 王筱绘 ， 白 露 ， 段昌柱 1) 2 ) (重庆医科大学临床检验诊断中心教育部重点实验室; 细胞生物学遗传学教研室，重庆 4000 16 ) 摘要 NIRF (Np95 / ICBP90 -like RING finger protein)是2002 年发现的一种核蛋白，其功能涉及细胞 增殖调节、蛋白多聚泛素化降解、细胞癌变进程控制等领域． 已有研究报道，NIRF 能与p53 相互作 用，NIRF 本身也是一个高度调节蛋白，在细胞正常的生理状态下发挥泛素化E3 连接酶的作用，结 合 p53 并将其降解，但 NIRF 与 p53 结合的蛋白结合域目前尚不清楚． 本文研究证明，NIRF 能与 p53 结合成复合体参与泛素化蛋白降解途径，并测定出NIRF 与p53 结合的区域． 为了检测NIRF 的 蛋白结合域，将空载体和 NIRF 缺失突变体质粒分别转染于 HEK293 细胞，蛋白表达水平通过 Western 印迹用两种抗体分别检测． 结果显示，所有的突变体都能在细胞中表达，并且两种抗体检 测结果完全一致． 同时，免疫共沉淀技术用于进一步分析实验结果． 由于泛素化蛋白通常伴随蛋 白酶体通路介导的降解，免疫共沉淀的蛋白纯化过程中用蛋白酶体抑制剂MG-132 以抑制蛋白降 解． 本研究结果显示，NIRF 通过PHD 区域与p53 形成复合体． 该复合体可能参与蛋白分选、蛋白 降解、DNA 修复以及细胞凋亡等一系列重要的细胞活动，从而形成与细胞增殖相关的新的信号通 路，在肿瘤的发生发展中可能发挥某种程度的作用． 关键词 NIRF ;p53 ; 蛋白结合域; 免疫共沉淀 中图分类号 R329 Identification of a NIRF-interacting Domain of p53 for its NIRF-mediated Ubiquitination WANG Xiao-Hui2 )，BAI Lu2 )，DUAN Chang-Zhu 1)，2 )* 1) ( Key Laboratory of Clinical Laboratory Diagnostics of M inistry of Education ， 2 )Dep artment of Cell B iology and Medical Genetics ，Chongqing Medical University ，Chongqing 4000 16