用RAPD技术鉴定两个小冰麦易位系.pdf

遗 传 学 报，20 （1）：81一87，1993 孟cta Genctica Sinica 用RAPD技术鉴定两个小冰麦易位系” 鲍 晓 明 黄 百 渠 东（北师范大学遗传与细胞研究所，长春 130024) 李松涛 张忠廷 王 斌 （中国科学院遗传研究所，A匕京） 本文对从小冰麦异附加系中选育出的两个抗锈品系小冰麦33号，小冰麦34号及其原始亲 本新曙光一号和杭源供体天兰冰草进行了RAPD分析，确定了小冰麦”号和小冰麦34号是 含一段冰草DNA的易位系。文中还讨论了RAPD做为一种准确、快速鉴定易位系的方法的 可行性。 关键词 易位，RAPD，小冰麦，天兰冰草 RAPD(RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA）是近几年出现的一种新的分子 生物学技术。它与 RFLP一样也是以检出DNA的多态性为目的，但检测的不是限制 性内切酶片段的多态性，而是 PCR反应特异扩增片段的多态性。RAPD的基本操作程 序就是 PCR反应，与常规 PCR反应不同的是 RAPD在每次反应中所用的引物为单个 随机引物，引物的长度一般是10个核昔酸，而常规PCR则用两个引物，一般为20-30 个核营酸。RAPD技术一出现即以其简便、快速和多态性检出率高而引起了科学工作者 的极大兴趣。它不象 RFLP那样需要用 DNA探针进行分子杂交等繁琐程序，只需通 过PCR反应，把扩增产物在琼脂糖凝胶中电泳，经澳化乙锭染色即可检测。因此，RAPD 在分子生物学的各个领域都具有广泛的应用前景。 RAPD技术最初是由Williams[16，和 Welsh，两个研究小组同时发展起来的。 Crowhurst等人用该技术对两个真菌品系做了分类学方面的鉴定，解决了经典真菌分 类学上的一个难题。Echt[91等研究了首落 RAPD特异扩增片段做为种群遗传分子标记 的可行性，丰富了首浩种群分子遗传标记的信息量。Martin等人通过比较两个番茄近 等基因系RAPD多态性，分离出了与抗 Pseudomona：的基因紧密连锁的 DNA片段， 并将其定位在番茄的连锁图中，使进一步分离抗Pseudomona：基因成为可能。Paran1131 等用类似的方法定位了葛芭霜霉病抗性基因。 Michetmore1121等也报道了类似的工作。 Reiter[141等对1200个引物进行了筛选，得到了225个 RAPD标记并定位在拟南芥菜的 连锁图中，增加了其遗传图谱中分子标记的密度。Halward+0)等则用RAPD研究了花 生各品种之间在进化上的关系。 本文于1992年，月4日收到。 1)本工作在中国科学院遗传所完A. 郝水先生对本文进行了认真修改，贾旭先生对本工作提出过宝贵建议，特此致 谢。 82 遗 传 学 报 20卷 郝水等〔“和何孟元等〔23创制了大量小冰麦异附加系（2n - 44),其中有些是抗锈病 的。异附加系的抗性被证明来自冰草，因为一旦附加的冰草染色体丢失后其抗性随之消 失〔710但在有些异附加系的后代中，染色体数虽由2n - 44恢复成2n～42，其抗锈性 状仍被保留了下来，因此怀疑在这些材料中冰草和小麦的染色体片段发生了易位。为了 证实这一点，我们对两个这样的材料（小冰麦33号，34号）及其亲本小麦新曙光一号和天 兰冰草迸行了RAPD分析。 材料和方法 （一）实验材料 亲本小麦新曙光一号和天兰冰草（Agropyron insermedium）及 小冰麦33号和小冰麦34号的种子均由东北师范大学何孟元教授堤供。种子在370C黑暗 条件下萌发1周，收取黄化苗，提取其DNAO （二）DNA的分离 取5克黄化苗，在液氮巾研成粉末，将研好的粉末转到50MI 的离心管中，加25m1的DNA提取缓冲液（42外Urea, 0.35mol/L NaCl, 50mmol/L Tri s·HCI pH8.0, 20mmol/ L EDTA, 21% Sarcosyl, 5 0% phenol)，用玻璃棒搅匀，加 0.75ml 20并SDS，倒转离心管数次使之混匀，在60℃下