IgY提取纯化方法.docVIP

IgY提取纯化方法 鸡卵黄中含有水分48.0%，蛋白质17.8%和脂肪30.5%，其中大部分脂肪与结合以脂蛋白的形式存在。卵黄包括水溶性蛋白γ-卵黄球蛋白，α-卵黄球蛋白，β-卵黄球蛋白。γ-卵黄球蛋白和各种脂，如LDL、HDL等。所以分离纯化IgY的关键是除去卵黄中高含量的脂及脂蛋白。 早在20世纪60年代初，科学家就发现鸡卵黄中存在IgG抗体，其含量与血清相似甚至更高，但一直未引起足够的重视，显然是由于很难将IgG抗体从丰富的卵黄脂质中分离出来，使得鸡蛋作为抗体来源的研究受到限制。直到80年代初，Polson和Jensenius相继建立了有效且相对简便的聚乙二醇（PEG）提取法和硫酸葡聚糖提取法，有关这方面的研究便如雨后春笋般大量涌现，并且被广泛应用在生物学的许多领域。 1 IgY的分离 分离的关键是除去卵黄中高含量的脂肪及脂蛋白，以获得水溶性组分（Water Soluble Fraction，WSF）。常见分离方法有以下几种： 1.1 有机物沉淀法 聚乙二醇（PEG）法和硫酸葡聚糖（DS）法是比较常用的方法。一般采用PBS或TBS作缓冲液，将卵黄液稀释5倍，加入一定比例的聚乙二醇6000（以3.5%最佳）或硫酸葡聚糖，脂类即发生沉淀，IgY保留在上清液中。Schwarzkopf C等在比较了6种分离方法后认为硫酸葡聚糖法具有快速、有效、简便等优点[2]。 1.2 有机溶剂