蛋白激酶C调控脊椎生物红细胞膜骨架蛋白间亲和力的进化演变.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(4): 460–468 蛋白激酶C调控脊椎生物红细胞膜骨架蛋白间 亲和力的进化演变 * 唐福州 王 翔 熊延连 邓雪茹 李遥金 王若峰 (重庆大学生物工程学院, 生物流变科学与技术教育部重点实验室, 重庆 400044) 摘要 为了探讨脊椎生物红细胞膜骨架蛋白间亲和力大小变化引起红细胞变形能力变化的 进化演变。四种脊椎生物(人、鸡、蛙、鱼)的红细胞在自然状态下和经蛋白激酶C(PKC)激活剂佛 波酯(PMA)孵育2 h后, 利用原子力显微镜(AFM)检测各红细胞的黏弹性以及采用间接免疫荧光标 记法观察各红细胞磷酸丝氨酸的荧光变化; 利用生物信息学软件分析和比对各红细胞膜蛋白4.1和 血影蛋白的蛋白序列。结果表明, 人、鸡、蛙、鱼红细胞经PMA孵育2 h后杨氏模量显著增加, 增 加量分别为(0.388±0.035) kPa 、(0.219±0.022) kPa 、(0.191±0.036) kPa和(0.141±0.007) kPa。鸡、蛙、 鱼红细胞膜蛋白4.1都存在与人所对应的312号可磷酸化丝氨酸位点且人、鸡、蛙、鱼红细胞经 PMA孵育2 h后的磷酸丝氨酸荧光强度明显高于各自自然状态下的磷酸丝氨酸荧光强度。意味着 鸡、蛙、鱼红细胞膜蛋白和人红细胞膜蛋白一样都能被蛋白激酶C(PKC)磷酸化, 且各生物经PMA 孵育2 h后杨氏模量增加量呈现出与生物进化过程一致的趋势。这种趋势在为红细胞变形能力的 获得在进化角度以及分子机制上提供了基础依据。 关键词 生物进化; 红细胞; 磷酸化 Evolution of the Vertebrate Erythrocytes Membrane Skeleton Protein Affinity is Caused by Protein Kinase C Tang Fuzhou, Wang Xiang*, Xiong Yanlian, Deng Xueru, Li Yaojin, Wang Ruofeng (Chongqing University College of Bioengineering, Key Laboratory of Biorheology and Technology, Chongqing 400044, China) Abstract To study the relationship between the vertebrate erythrocytes membrane skeleton protein af- finity and deformability of RBCs. Atomic force microscope (AFM) was applied to detect the viscoelasticity and fluorescence intensity was observed by indirect immunofluorescence labeling of these vertebrate erythrocytes (hu- man, chicken, frog, fish) that were treated with Phorbol-12-myrisrate-13-acetate (PMA), a PKC activator, for 0 minutes, 2 hours, respectively. Bioinformatics softwares were used to compare the RBCs protein 4.1 and α-spectrin sequence. The measured Young’s modulus of erythrocytes (human, chicken, frog, fish) increased significantly after PMA treatme