鸡场实验室常规检测.pptVIP

概 述 细菌对抗菌药物的敏感试验 抗体检测（HA/HI） 细菌性药敏试验 细菌性疫病的发生特点 1．疫病复杂化，条件性细菌病的危害加大 　 据生产实践，条件性致病菌在良好的饲养环境和有效的防疫措施下，基本上不会带来危害。但在某些疫病感染或防疫条件不良的情况下，就会诱发疫病。 2．症状复杂化，给疫病诊断带来一定困难 　 近年来，畜禽疾病的普遍表现是症状复杂化，表现为某些细菌性疫病与病毒病并发感染或继发感染，构成多病因性疾病，使疫病诊断更加复杂化。多病原的并发或继发感染，使疫病的快速准确的诊断与有效防治变得越来越困难。 3．滥用抗生素，导致大量耐药菌株产生 　 一些养殖场由于缺乏科学饲养技术和兽医诊疗知识，对临床动物疫病很难进行针对性治疗，一旦发病，多用抗生素、抗病毒类药物进行盲目治疗，治标不治本，极易造成病情延误，甚至干扰肠道内正常微生物菌群，失去微生物的互相制约作用，致使某些非致病菌大量繁殖，引起“二次感染”；更严重的是，由于滥用抗生素导致大量耐药菌株产生，给疫病治疗带来困难。另一方面，由于饲料厂家为了提高饲料的疾病预防作用，在饲料中添加不同成分的的抗菌药物，加速了饲养动物的抗药性产生，尤其是某些鸡场由于长期使用土霉素等，使大肠杆菌、沙门氏菌等细菌逐渐产生了抗药性，一旦发生大肠杆菌病、沙门氏菌病，这类药物即失去了治疗作用。 意义 可预测抗菌治疗的效果 指导抗菌药物的临床应用 发现细菌耐药机制的存在,有助于临床选药 评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性 对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的鉴定 细菌性药敏试验 纸片扩散法 肉汤试管稀释法 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。 （1）敏感（sensitive）：指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。 （2）中度敏感（moderate sensitive）：指通过提高某种抗菌药物的剂量或在该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染被治愈。 （3）中介度（intermediate）：这一范围是“缓冲域”，是由操作上的误差造成的，不作为报告形式。如确需明确该药的敏感度，需重复试验或做稀释法敏感试验。 （4）耐药(resistance)：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。 （5）最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。单位：μg/ml 或 U/ml 。 （6）最低杀菌浓度(minimal bacteriacidle concentration)：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。单位：μg/ml 或 U/ml 。 观察纸片周围有无抑菌环形成，并测量其直径大小，以判定细菌对药物的敏感程度，记录和报告结果。 判定标准：实验条件不同，判定标准有所不同。对于一般抑菌环的直径，20 mm以上极敏;15 mm以上者为高度敏感；10-15 mm为中度敏感；10mm以下为低度敏感；无抑菌环者为耐药。 纸片扩散法中，最常用的质控菌株为大肠埃希菌 ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923和铜绿假单胞菌 ATCC27853。 琼脂扩散法 ①将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于琼脂平板上（密集划线法）。 ②用蜡笔在平皿底面将其分为4个区域，分别标记抗生素的名称。 ③用灭菌后的镊子夹取各种抗生素滤纸片，平放至培养基表面的相应位置。 ④置37℃培养24h，测量滤纸片周围的抑菌圈的直径。 方法 标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察 1.标记分区 2.密涂接种 3.贴片 4.培养 置37℃温箱， 倒置培养18h 5.结果观察 Kirby-Bauer 法试验程序 （a）挑取菌落（b）转种肉汤（c）比浊（d）涂布平板上（e）放置药敏片（f）量取抑菌圈大小 注意事项 接种时均匀密涂 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之与培养基充分接触 贴片后不能再更改纸片位置 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不同抗生素交叉影响 整个贴片过程应在15min内完成 常用药敏试验纸片判断标准 影响药敏结果的因素 1.培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌