吴洪超 中期考核汇报.pptVIP

　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 汇报人：吴洪超 导 师：陈立志 研究员 致病性坏死梭杆菌血凝素相关基因的克隆及其原核表达 中期考核汇报 ? 汇报内容 : 立题依据和意义 1 研究内容 2 下一步计划 3 立题依据及意义 坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum） 分为Fnn亚种和Fnf亚种。 国内外对坏死梭杆菌白细胞毒素进行了大量研究， 而对粘附作用的研究却很少。由于血凝素和粘附素 的作用非常相似，那么为了明确血凝素在粘附中的作 用，阐明坏死梭杆菌的致病机理，有必要对坏死梭杆 菌血凝素进行研究，进一步为坏死梭杆菌基因工程亚 单位疫苗的研究提供理论依据 研究内容 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 实验二、坏死梭杆菌对小鼠LD50的测定 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 参考相关文献 细菌培养、染色镜检结果： 在BHI血平板上，菌落呈小而凸起、表面湿润、边缘光滑的菌落，β 溶血。 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 生化鉴定结果——在种的水平上鉴定为 Fusobacterium necrophorum （99%） 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 分子鉴定结果——在亚种水平上鉴定为Fnn亚种 参考相关文献 参考地方标准 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 测序结果 1. lkt A启动子区 1076bp 2. rpo B 926bp 3. HA 253bp 实验一、坏死梭杆菌的纯化与鉴定 LD50的测定 实验二、坏死梭杆菌对小鼠LD50的测定 染色体步移 巢式PCR 胶回收、初步验证 连接克隆载体、转化、测序 设计特异性引物、使用高保真酶进行再次验证 序列拼接、比对 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 5’ 3’ 未知序列 已知序列 2445bp 未知序列 795bp 1248bp 1000bp 序列拼接结果：分别重叠174bp、272bp、112bp 拼接为4930bp的片段。 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 待扩增 待扩增 5’端第一次延伸 1248bp 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 3’端第一次延伸 1000bp 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 5’端第二次延伸 795bp 拟发表《致病性坏死梭杆菌血凝素相关基因的克隆、测序及序列分析》 实验三、血凝素相关基因全长的克隆 下一步计划 抗原优势区的表达 软件预测 原核表达 制备抗血清 ELISA、CIEP Western Blot 蛋白质亚细胞定位 全细胞（细胞破碎） 间接免疫荧光 免疫电镜 激光共聚焦 拟发表《致病性坏死梭杆菌血凝素相关基因的原核表达及其免疫特性分析》 敬请老师批评指正！ * 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 　　　　 *