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选修三 现代生物科技专题;;(2)限制酶与DNA连接酶的关系 ;例1　(2010·浙江卷，2)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 (　　) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞;2.载体 (1)种类 ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 (2)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内复制，对目的基因进行大量复制。;;例3.(2011.江苏高考)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。 ;例4.（2010·安徽池州调研）如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是( );;二、基因工程基本操作程序 1.目的基因的获取途径 (1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因库中获取。 (2)人工合成目的基因 常用的方法有： ①已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板。 ②以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。;2.基因表达载体的构建（基因工程的核心）;3.将目的基因导入受体细胞;4.目的基因的检测与鉴定 （1）分子水平检测 ①导入检测：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段作探针检测。;为自己争气，为母校争光;综合练习;在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成________，常用抗原-抗体杂交技术。 （3） 如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目睹基因插入农杆菌Ti质粒的__________中，然后用该??杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_________上。 ; 2 （2010·天津理综）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamH Ⅰ、Hind Ⅲ、Sma Ⅰ直线所示为三种限制酶的酶切位点。;据图回答： （1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用___________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含___________的培养基上进行。 （2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是___________（填字母代号）。 A.启动子 B.tetR C.复制原点 D.ampR ;（3）过程①可采用的操作方法是_______（填字母代号）。 A.农杆菌转化 B.大肠杆菌转化 C.显微注射 D.细胞融合 （4）过程②采用的生物技术是___________。 （5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。 这利用了细胞的___________性。;（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_______（填字母代号）技术。 A.核酸分子杂交 B.基因序列分析 C.抗原—抗体杂交 D.PCR ;三、基因工程的应用 （1）乳腺生物反应器与微生物生产的比较; 乳腺生物反应器受生物性别的限制，若从动物尿液中提取目的基因产物则不受性别限制。;(2)基因治疗;走进高考3 （2006·全国Ⅰ理综）采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以下有关的叙述，正确的是( ) A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍 B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵 C.在该转基因羊中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D.人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA;五、蛋白质工程与基因工程的比较;走进高考4