组培技术-公开课件（讲义）.pptVIP

组织培养的基本设备和一般技术 目的与要求 了解实验室的设计与要求; 初步掌握无菌操作的基本基术; 熟练的应用部分仪器; 讲 授 内 容 一. 实验室的设计与要求 二. 基本设备 三. 无菌操作 四. 培养条件 五. 定期检查 第二章 组织培养的基本设备和一般技术 一. 实验室的设计与要求 植物组织培养的主要过程是在无菌条件下进行的. 因此,要求有必要的实验条件.标准的组织培养室应该 具备以下几个方面的设施要求: 玻璃、塑料器皿的清洗与储存 培养基的制备、灭菌与储存 植物材料的无菌操作 可控的培养条件,培养物的观察 植物苗木的炼苗，移栽 植物组培准备室 植物组培接种室 功能 :植物材料的接种、培养物的转移、试管苗的继代等,均要求在无菌环境下进行. 植物组培接种室 要求: 封闭性好,干燥清洁,能长时间保持无菌. 定期消毒 用甲醛和高锰酸钾熏蒸或用70%的乙醇、0.5%的苯酚喷雾降尘消毒. 紫外灯灭菌. 严禁闲杂人员进入. 植物组培培养室 功能 :培养室主要是进行离体材料的控制培养。 要求:能控制光照和温度，防止微生物感染，培养室应保持清洁、明亮、无灰尘、干燥。 植物组培炼苗室 功能 :主要是进行组培苗过渡苗的炼苗。 要求：清洁、明亮、有一定的湿度、可控温、无灰尘． 实验室组成 2.辅助实验室(细胞学实验室、生化分析室、摄影室和暗室)　 细胞学实验室: 功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。 要求：清洁、明亮、无灰尘、干燥、使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 实验室组成 生化分析室:是以培养细胞产物为主要目的的实验室，应建立相应分析化验实验室，便于对培养的有效成份随时进行取样检查． 实验室组成 摄影室和暗室:　其功能是进行培养细胞材料的摄影记录和胶片冲印． 2．　基本设备 基本设备:冰箱、天平、酸度计、纯水器、微波炉、电炉 基本设备 灭菌设备:蒸汽压力灭菌锅、消毒柜、喷雾消毒器、紫外灯. 　基本设备 无菌操作设备:超净工作台,接种箱. 基本设备 光温控制设备:时间程序控制器、空调及温度感应器。 基本设备 细胞培养设备 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。 基本设备 细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。 倒置显微镜 基本设备 除上述基本设备外，如果有条件和需要还可以配制摄影设备、生化分析设备等。 ３. 培养器皿及实验用具 玻璃器皿 培养器皿及实验用具 金属才质用具 解剖刀,剪刀 镊子. 第二节. 基本技术 一. 洗涤技术:玻璃器皿一般采用二步洗涤法,即先用硷洗(肥皂粉)----水清洗----酸洗 洗涤液-----可根据需要配制成弱,中, 强三种. 弱---用重铬酸钾50g, 蒸馏水1升,加热溶化,冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml. 中---用重铬酸钾50g,加入蒸流水100ml,加热溶化,冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml. 重---一般浓硫酸1升,加入重铬酸钾50g. 基本技术 二.洗涤方法 1.玻璃器皿洗涤 2.塑料用品洗涤 3.金属用品洗涤 基本技术 三. 灭菌.消毒技术 1．物理方法培养基的灭菌:干热灭菌,湿热灭  菌,射线处理。 2．化学方法:消毒剂,抗菌素灭菌。 A．培养基灭菌, 采用湿热灭菌法 培养基含有高度营养物质,因此易受细菌和霉菌的污染,并产生有毒物质,导致外植体死亡.所以说无菌条件是组织培养的最基本的条件。 基本技术 方法．　一般采用高压灭菌.不论是固体培养基还是液体培养基都应分装在较小的器皿中加塞封口. 置于蒸汽消毒锅中.一般实验室常用医疗方面的高压灭菌锅.进口的高压灭菌锅可自动控制温度时间 待锅内水沸腾后,压力上升到0.5kg/c㎡时，放气５分钟继续加热． 基本技术 使锅内蒸汽压力稳定在１.０ ～ １.３kg/c㎡，保持２０ ～ ４０分钟．注意，不要使压力上升过高以免引起灭菌锅爆炸． 待灭菌锅的压力指针回到零，才可以打开盖子． 取出培养基应放置在比较平的台面上，防止琼脂固化后呈斜面． 基本技术 基本技术 Ｂ．玻璃器皿灭菌，采用干热灭菌。 　将洗净的玻璃器皿在１６０度＿１８０度干热处理３小时，待冷却后取出，也可放入水中煮沸消毒。如果玻璃器皿上或瓶塞上粘着了干琼脂,可置于高压灭菌锅中,在较低温度下使之溶化,再进行清洗。 基本技术 Ｃ．金属用具灭菌，采用湿热灭菌或７０％的酒精灭菌。 刀、剪、镊、等用具在使用前浸泡在７０％酒精中，用时再在火焰上消毒，待冷却后使用。也可将它