木瓜酶活性的提高对蛋白质水解效果.pptVIP

题目：木瓜酶活性的提高对蛋白质水解效果 成员：2008级生物工程 王佳宁 2008级生物工程 漆亚乔 2008级生物技术 李芮 取青木瓜浆汁制成浊液 过滤 取滤液透析 结论： 在55℃水浴条件下，木瓜酶与足量底物反应10min，得到的酪氨酸用酚试剂测定其含量。根据OD值计算可知： Na2SO3和EDTA二钠可以提高木瓜酶活性，分别提高78.7%和24.8% Cu2+和Zn2+的引入会降低木瓜酶的活性，分别减小41.1%和49.6% 在纯木瓜酶的反应中可得知： EDTA二钠可与金属离子螯合，降低金属对酶活的影响。 但是加入顺序不同效果就不一样。 先Cu2+后EDTA二钠，Cu2+使酶变性； 先EDTA二钠后Zn2+，有效保护酶活性。 * * 实验目的： 以未成熟的青果木瓜浆汁为原料，提取木瓜酶（木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶A、木瓜凝乳蛋白酶B及木瓜肽酶）。通过利用适量的激活剂，提高木瓜酶的活性，得到更好的蛋白质水解能力。寻找最适激活剂，在生产、应用中尽量避免加入抑制剂。 这一段 和目的好像没有什么关系 可不可以删去呢 如果删去的话 后面那一段要做相应的调整 方法： 收集新鲜木瓜乳汁，处理后得到木瓜酶液。向酶液中加入不同添加剂（激活剂或抑制剂），与酪蛋白底物反应相同时间，通过测定反应后酪氨酸的含量，说明不同添加剂对木瓜酶催化反应的影响。 制成酶液 在不同添加剂环境下测定酶活 绘制酪氨酸标准曲线 根据标准曲线，分析不同添加剂的作用机理 实验步骤： a.取9支试管，编号，按下表格加入试剂。 单位：(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 酚试剂 5 5 5 5 5 5 5 5 5 碳酸钠溶液 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 蒸馏水 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 500ug/ml酪氨酸溶液 8 7 6 5 4 3 2 1 0 试剂 b.振荡、置于30℃恒温水中显色15min c.用分光光度计在A680nm处测定680nm的光吸收值 d.以酪氨酸含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制酪蛋白的标准曲线, 根据散点写出回归线性方程。 绘制酪氨酸标准曲线： 1 1 1 1 1 1 1 1 1 酚试剂 7 7 7 7 7 7 7 7 7 碳酸钠 过滤，取滤液2ml 55℃水浴反应10分钟后，用2ml 10%三氯乙酸沉淀蛋白质 5 5 5 5 5 5 5 5 酪蛋白 1 1 ZnSO4 1 1 CuSO4 1 1 1 EDTA二钠 1 Na2S03 1 1 1 1 1 1 1 1 木瓜酶液 1 1 1 1 2 7 3 蒸馏水 8 7 6 5 4 3 2 1 0 试剂 用分光光度计在A680nm处测定光吸收值。 不同添加剂环境下酶活力的测定： ++++ ++++ +++++ +++++ + + ++ +++ ++++++ 现象 (白色沉淀) 8 ZnSO4 EDTA二钠 7 CuSO4 EDTA二钠 6 ZnSO4 5 CuSO4 4 EDTA二钠 3 Na2S03 2 无添加剂 1 无蛋白有酶 0 有蛋白无酶 0.562 0.754 0.694 0.812 1.720 2.462 1.378 0.067 0.314 OD值 ++ +++ +++ +++ +++++ +++++ ++++ + ++ 现象 (浅蓝--灰蓝--深黑蓝) 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0号 2号 3号 4号 5号 6号 7号 8号 0 有蛋白 无酶 8 ZnSO4 EDTA二钠 7 CuSO4 EDTA二钠 3 Na2S03 4 EDTA二钠 1 无蛋白 有酶 5 CuSO4 6 ZnSO4 2 无添加剂