实验十四酵母蔗糖酶的提取纯化及活力测定培训资料.pptVIP

实验十四 酵母蔗糖酶;蔗糖酶的提取纯化 ;二、实验原理 蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC 3.2.1.26），是一种水解酶。它催化蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。因此，每水解1 mol 蔗糖，就生成2 mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，如Nelson 比色法、斐林试剂法等。 本实验用干酵母为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶（invertase），并对其性质进行测定。 ; 采用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量，由此即可得蔗糖水解的速度。 在研究酶的性质、作用、反应??力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替使用，才能得到较为满意的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。蛋白质在分离纯化过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离效果。啤酒酵母中，蔗糖酶含量丰富。; ;三、实验的主要材料 市售干酵母粉 四、实验的主要试剂 1、石英砂（助研磨作用）。 2、 95％乙醇（沉淀杂蛋白）。 3.、 DEAE—Sepharose FF(弱碱性阴离子交换剂，用于蛋白质分离)。 4、 20mmol/Lp