上海交通大学遗传学课件9标记检测和PCR汇总.pptVIP

实验九、DNA的PCR扩增及其检测 一、实验目的 了解聚合酶链式反应(PCR)的原理 掌握PCR实验的方法 PCR结果的检测 二、实验原理 (一)PCR的原理 PCR是以单链DNA为模板，四种dNTP为底物，利用寡核苷酸引物与模板3’端的特异性结合，在DNA聚合酶的催化下合成模板的互补链 PCR反应通常包括25-30个循环，每个循环由变性、退火、延伸三个步骤组成。假定扩增效率为1，经过30个循环后，目标DNA分子数将提高到起始时的1073741824倍（即230倍） 时间(min) 55 72 94 温度 (℃) 第n个循环 变性 退火 延伸 延伸 变性 Y=X(1+E)N Y:扩增后目标DNA分子数；X:起始时目标DNA分子数；E:扩增效率 (0≤E≤1)；N:扩增循环数 （在理想条件下） PCR的技术关键 引物设计、引物保存、防止污染、反应条件优化、…… PCR的衍生技术 反转录PCR、反向PCR、巢式PCR、原位PCR、多重PCR、多重等位基因PCR、不对称PCR、锚定PCR、荧光定量PCR、…… PCR的应用 基因克隆、DNA测序、定点突变、基因分型、疾病诊断、亲子鉴定、嫌犯验证、转基因检测、基因表达水平分析、…… PCR产物电泳(照片） 酶切产物电泳（示意图） (三)PCR产物检测的方法 三、实验材料和试剂 (一)PCR扩增 1.模板：番茄(Solan