HPV分子生物学与宫颈病变病理诊断教学教案.pptVIP

低危型HPV主要见于生殖器疣，常见的型别为6型和11型。 高危型HPV与癌前病变和宫颈癌相关，常见的型别为16型和18型。 检测方法有分型检测与不分型检测。 HPV-DNA检测 HC2（不分型） 操作步骤： ①裂解→②杂交→③捕获→④抗原抗体反应→⑤信号放大→⑥结果判读 HC2结果判读：≥1.0pg/ml为阳性，相当于5000拷贝。 如何正确理解HC2的检测结果？ PCR-RDB（分型检测） DA8000全自动核酸分子杂交仪 HPV-DNA分型检测的临床意义？ ① 能区分持续或反复感染。 ② 不同型别有不同的患病风险。 ③ 不同型别有不同的处理方案。 ASCCP2009版指南指出：≥30岁女性 细胞学阴性，而HPV16或18型阳性者，建议阴道镜检测。 细胞学阴性，其它HR-HPV型阳性者，一年后复查HPV-DN 和细胞学。 HPV E6，E7 mRNA检测 HPV 的E6、E7是病毒癌基因，它们的翻译产物介导抑癌基因p53和Rb的降解，从而干扰细胞周期调节。如若癌基因没有表达，则细胞本身不会发生癌变。 E6蛋白能与细胞内 E6相关蛋白 ( E6 AP)形成复合物 ,特异性地结合 p53,并通过依赖蛋白酶系统将其水解 ,使其对细胞生长负调节功能丧失 ,从而引起细胞无限增生并向恶性转化。 E7蛋白是 HPV的主要转化蛋白 ,与控制细胞周期有关的肿瘤抑制蛋白视网膜母细胞瘤蛋白 (Rb)亲和力极高 . E7与 Rb结合使 Rb E2F复合物解离 , E2F被游离 ,从而发挥其转录因子的作用 ,导致细胞周期失控而发生永生化。 HPV E6/E7mRNA 在宫颈组织中表达，说明HPV 病毒表达出癌基因活性。 bDNA技术原理 HPV 相关蛋白检测 人体的细胞周期包括G1，S,G2，M四个时相，且存在多个检查点调节各时相点的转换及细胞周期进程。其中以G1→S期最为重要，因为细胞一旦从G1期进入S期，则不再依赖外界信息刺激而很快自动完成分裂过程，因此G1卡点可以决定细胞继续增值或进入G0期或离开细胞周期进入终末分化或死亡。 细胞周期卡点的转换受控于“细胞周期蛋白（cyclins）-细胞周期依赖性激酶（cdks）-细胞周期依赖性激酶抑制因子（clks）”这组分子网络。 研究最为广泛的一组是：Cyclin D1/cdk4/P16。P16在细胞周期G1卡点中与CyclinD1竞争结合cdk4并特异性抑制其活性，组织细胞尤其是带有损伤DNA的细胞进入S期，从而控制细胞分裂。 P16： 1.在LSIL的敏感性和特异性为74%，在HSIL中则达到97%以上。 2.在LSIL中的表达为点状，散在分布；在HSIL中的表达为灶状，片状连续分布。 P16 P16 Cyclin D1： 1.在正常宫颈组织中低表达，在CIN和宫颈鳞癌中表达增加并逐渐加强。 2.促进细胞周期紊乱，细胞异常增殖。CyclinD1过度表达可能导致细胞G1期缩短，细胞过度增殖失控而促进肿瘤的发生。 Ki-67: 1.在细胞周期的G1后期，S,G2，M期呈高表达，而在静止的G0期细胞呈低表达。 2.Ki-67半衰期短，脱离细胞周期后迅速降解，检测结果的可靠性明显优于半衰期长的增殖细胞核抗原，是最能反映细胞增殖状态的蛋白标志物之一。 3.Ki-67用于CIN的鉴别诊断，主要用于萎缩性病例，而对反应性改变，化生性改变，修复性改变意义不大（细胞增殖指数也很高）。 HPV分子生物学及宫颈病变病理诊断 彭振武 PZW7509@163.COM 广州安必平医药科技有限公司 一，HPV简介 二，HPV与宫颈癌的关系 三，HPV相关细胞学形态改变及判读要点 四，HPV检测方法及宫颈病变的病理诊断 五，HPV疫苗的研究进展 （一）HPV简介 1.完整的病毒颗粒为一个感染单位，外形呈20面体对称型，外壳有72个衣壳体。 2.HPV基因组为环状双链DNA，含有近8000个碱基对。分为早期区，晚期区和长控区。 Human papillomavirus（HPV） HPV基因组 早期转录区 E1 涉及病毒DNA复制，在病毒起始复制中起关键作用 E2 抑制病毒转录复制，E2失活直接导致E6，E7过度表达 E4 与病毒成熟胞浆蛋白有关，破坏胞浆中间细丝（纤维）， 促进病毒颗粒释放 E5 位于E2下游，通过细胞生长因子受体激活上调控 E6 促进P53过早降解而抑制P53功能，并能阻止和干扰细胞凋亡，引起细胞无限增生并向恶性转化 E7 通过抑制pRB而消除细胞周期阻滞，导致细胞周期失控而发生永生化 晚期转录区 L1 主要衣壳蛋白，LI:L2大约30:1