9蛋白质的化学修饰.pptVIP

* 化学修饰的原理 化学修饰的方法学 蛋白质侧链的修饰 蛋白质肽链的交联 亲和标记 蛋白质化学修饰的应用 内 容 提 要 （第九讲） 三、羧基的修饰 用水溶性碳二亚胺作催化剂，通过胺专一地修饰蛋白质中的羧基。 + + HX + 碳二亚胺 形成相应酰胺 重排 四、巯基的修饰 由于半胱氨酸时蛋白质中反应性最强的残基，所以很多试剂可用来修饰巯基侧链。 常用的有三类： 1.碘乙酸、碘乙酰胺或环乙烯亚胺 2.马来酰亚胺或马来酸酐 3.有机汞试剂 （一）1类试剂是烷化剂，此类试剂还能与甲硫氨酸、赖氨酸或 组氨酸反应。 pH﹥7 碘乙酸 半胱氨酸 副反应： pH﹥5.5 组氨酸 pH=2～8.5 pH=8.5 甲硫氨酸 （二）2类试剂能与巯基形成对酸稳定的衍生物，而与其它基团形成的产物则对酸不稳定。 + pH ﹥5 副反应： + pH ﹥7 半胱氨酸 （三）3类试剂对巯基专一性最强。常用的是对氯汞苯甲酸，S-汞-N-5-二甲氨基萘磺酰半胱氨酸是对氯汞苯甲酸的衍生物，也可与巯基反应。 马来酸酐 + 对氯汞苯甲酸 + S-汞-N-5-二甲氨基萘磺酰半胱氨酸 （四）5，5′-二硫双硝基苯甲酸（DTNB）也常用于修饰巯基，它与半胱氨酸形成混合二硫化物。 + pH ﹥6.5 + DTNB 2-硝基-5-硫代苯甲酸 释放出的2-硝基-5-硫代苯甲酸阴离子在412nm处有 吸收，可用光谱法测