免疫荧光操作步骤(漂片,冰冻切片).pdf

免疫荧光操作步骤（漂片，冰冻切片） 免疫组化步骤： 1.将脑片放到， 6 孔板 （或12 孔板），按照二抗说明书， 加 3% 双氧水封闭 10min （如果是从切片保护液取出，则要用 PBS 洗一遍）；（二抗不同，操作步骤有差 别），本实验室使用的二抗试剂盒为中杉金桥超敏二步法试剂盒； 2.吸去双氧水， PBS 洗两遍，将脑片周围的水用吸水纸或卫生纸擦净，注意不要 碰到脑片； 3.然后按照一抗说明书，将一抗按比例稀释，加入稀释后的一抗，一般，大鼠脑 片一张需 50 微升一抗稀释液，小鼠脑片为 30 微升；注意不要让液体流到边上； 如果流到边上，要重新加或者加大量，使脑片完全浸入液体； 4.然后， 4 ℃，过夜（ 18h 或者 24h ），不建议使用 37℃； 5.然后， PBS 洗净两遍；剩下步骤见二抗试剂盒说明书。 6.DAB 配方为： 10mg DAB 固体加到 20ml 0.01MPBS ，临用时加 100-200 微升 30% 双氧水，注意避光。 7.显色 10min ，看片子染色深浅情况适当调整显色时间。一般